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炎性反应与骨骼健康
炎性反应性疾病造成的骨丢失与炎性反应影响RANK-RANKL-OPG轴、Wnt/β-catenin信号途径和骨重建失衡相关,可导致骨量减少且增加骨折风险.本文对炎性反应致骨量减少/骨质疏松机制及治疗进展进行综述.
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钙结合蛋白S100A6对Wnt/β-catenin信号途径的影响
目的 研究钙结合蛋白S100A6对Wnt/β-catenin信号途径的影响及其机制.方法 异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达、谷胱甘肽-琼脂糖球珠分离纯化融合蛋白GST-hS100A6;Western blot和荧光素酶活性分析法检测S100A6对细胞内β-catenin水平和β-catenin/T细胞因子4(TCF4)活性的影响;GST-pulldown和Western blot技术研究S100A6与该信号途径主要成员β-catenin、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、Dvl和Axin之间的相互作用.结果 S100A6可致MG63和HCT116细胞β-catenin水平升高,并可使HEK293细胞β-catenin/TCF4活性增强;S100A6与β-catenin、GSK-3β和Dvl之间存在着直接的相互作用,而与Axin之间无相互作用.结论 S100A6能够增强Wnt/β-catenin信号途径的活性,其机制可能涉及S100A6与该途径重要成员β-catenin、GSK-3β和Dvl之间存在着直接的相互作用有关.
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盐霉素抗癌细胞及癌干细胞作用的研究进展
盐霉素能够抑制多种癌及癌干细胞增殖及转移,并促进其凋亡.这种抑制作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号途径,诱导癌细胞及癌干细胞中凋亡蛋白表达增加,并克服癌细胞及癌干细胞的凋亡抵抗作用,诱导癌细胞及癌干细胞氧化应激反应,增加细胞中的活性氧(ROS)来实现的.本文就盐霉素对癌细胞及癌干细胞抑制作用及相关机制进行综述,为盐霉素的进一步深入研究奠定基础.
关键词： 盐霉素 癌细胞 癌干细胞 Wnt/β-catenin信号途径 -
外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制
目的 探讨外源性S100A6对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 采用MTT、台盼蓝拒染、Hoechst、Western blot、免疫细胞化学、免疫荧光和荧光素酶活性分析法检测S100A6对B16细胞增殖、凋亡、β-catenin的水平和分布、β-catenin/TCF4转录活性及经典Wnt信号途径(即Wnt/β-catenin信号)的下游靶基因c-myc表达的影响.结果 GST-hS100A6可抑制B16细胞的增殖,且呈时间-剂量依赖性；GST-hS 100A6作用72 h后,B16细胞的凋亡率较GST对照组增加1.43倍；携带S100A6基因的重组腺病毒AdS100A6作用72 h后,B16细胞中β-catenin的表达量较对照腺病毒AdGFP组增加43.9％；GST-hS100A6可使B16细胞中β-catenin的表达增加,且以胞核增加为主；GST-hS100A6作用后,B16细胞的β-catenin/TCF4转录活性增至GST对照组的7.4倍,且该信号途径的靶基因之一c-myc的表达也增加70.4％.上述结果与GST对照组之间的差异均有统计学意义(P均＜0.05或0.01).结论 S100A6具有抑制黑色素瘤增殖、促进凋亡和上调其Wnt/β-catenin信号途径活性的作用,且上调Wnt/β-catenin信号途径活性可能是S100A6对黑色素瘤抑制性作用的机制之一.
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丹参对血管紧张素Ⅱ致肾小球系膜细胞Wnt/β-catenin信号通路活化干预的影响
目的:基于Wnt/β-catenin信号通路,探讨丹参对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)刺激肾脏系膜细胞后的影响.方法:浓度为(0~10 -5mol/L)AngⅡ刺激系膜细胞,以及浓度为10 -6mol/L的AngⅡ在不同时间(0 min~24 h)刺激系膜细胞,分别用氯沙坦和丹参注射液干预.用实时定量PCR与Western Blot方法分别检测细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1mRNA与蛋白水平,用ELISA 方法测定细胞上清中纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量.结果:AngⅡ使系膜细胞Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达增加,FN水平升高,呈现剂量、时间依赖性.浓度为150 mg/mL的丹参注射液干预后,Wnt-1、β-catenin、PAI-1表达以及 FN 水平明显下降,与ARB作用相当.结论:AngⅡ通过刺激Wnt/β-catenin信号途径活化致肾小球硬化,而丹参能通过抑制AngⅡ诱导的系膜细胞Wnt/β-catenin信号途径活化进而下调PAI-1表达与FN合成而发挥抗肾小球硬化的作用.
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Wnt/β-catenin信号途径在糖尿病肾病患者肾小管间质损伤中的作用
目的 探讨Wnt邝-catenin信号途径在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者肾小管间质损伤中的作用.方法 收集DN患者46例,根据肾小管间质损伤程度分为轻+中度组及重度组,以10例肾肿瘤患者瘤旁组织作为对照组.采用免疫组化SP法检测肾组织中Wnt4、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(phospho-glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)、β-catenin的表达;分析三者表达与临床指标、肾小管间质损伤积分的相关性.结果 与轻+中度DN组及对照组相比,重度组DN尿蛋白增多,肾小管间质损伤积分增高.肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,eGFR)下降.DN轻+中度组肾小管上皮细胞Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin表达较对照组增强;且三者表达与24 h尿蛋白、肾小管间质损伤积分呈正相关,与eGFR呈负相关.结论 Wnt/β-catenin信号途径可能参与DN患者肾小管间质纤维化的过程.
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hS100A6抑制卵巢癌细胞HO8910和HO8910PM增殖、促进凋亡并上调其Wnt/β-catenin活性
目的 研究hS100A6(human S100A6)对人卵巢癌细胞系(低转移系HO8910和高转移系HO8910 PM)增殖、凋亡和Wnt/β-catenin信号途径的影响.方法 通过MTT以及台盼蓝染色检测细胞增殖的变化；Hoechst检测细胞凋亡的变化；提取细胞总蛋白及核蛋白Western blot检测hS100A6对β-catenin的影响.结果 MTT及台盼蓝染色结果显示hS100A6抑制HO8910细胞和HO8910 PM细胞的增殖(P＜0.05),Hoechst染色结果显示hS100A6同时促进这两系细胞的 凋亡(P＜0.05)；Western blot显示hS100A6增加β-catenin的水平并促进其发生核转位.结论 hS100A6能抑制人卵巢癌细胞系HO8910和HO8910 PM增殖,促进其凋亡,同时激活Wnt/β-catenin信号途径.
关键词： S100A6 卵巢癌 Wnt/β-catenin信号途径 -
钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-catenin信号途径活性的上调作用
目的 研究钙结合蛋白S100A2对Wnt/β-eatenin信号途径活性的影响,并探讨其可能的机制.方法 原核诱导表达GST-hS100A2,经纯化后加入骨肉瘤细胞株MG63和人结肠癌细胞株HCTl 16的培养液中,Western blot检测细胞中β-catenin含量的变化;荧光素酶活性分析法检测S100A2对HEK293细胞中β-catenin/TCF4活性的影响;以表达GSK-3β、DVL、Axin的相应质粒分别转染HEK293细胞,GST-Pulldown/Western blot实验检测S100A2与这些蛋白质和β-catenin之间的相互作用.结果 S100A2使MG63和HCT116细胞中β-catenin含量增加、β-eatenin/TCF4活性增强;S100A2分别与β-catenin和GSK-3β之间存在相互作用,而与DVL和Axin之间则未发现相互作用.结论 S100A2可以上调Wnt/β-catenin信号途径的活性,其机制柯能涉及S100A2与β-catenin和GSK-3β之间的相互作用.
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稳定表达HBx的肝前体细胞株的构建及其对增殖的影响
目的 构建稳定表达乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)的肝前体细胞株,检测对肝前体细胞增殖,细胞周期及Wnt/β-catemn信号通路的影响.方法 重组质粒pSEB-Flag-HBx与包装质粒pAmpho共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装获得携带HBx基因的重组逆转录病毒,并感染小鼠肝前体细胞HP14.5,稻瘟菌素(blasticidin)筛选出稳定表达HBx基因的细胞克隆并扩大培养(HP14.5/HBx组),设HP14.5/Rv(空质粒pSEEB-Flag感染组)及空细胞组HP14.5组为对照组.MTS比色法检测各组细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞周期中各时相所占的比例,荧光定量PCR检测cyclin D1和c-myc mRNA的表达量,Western blot法检测HBx、GSK3β、p-GSK3β(ser-9)、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等蛋白的表达.结果 RT-PCR和Western blot法检测到HBx基因和蛋白阳性表达,与对照组相比,HP14.5/HBx细胞增殖活力显著增加(P＜0.05)；G1细胞比例明显减少(P＜0.05),S期和G2细胞比例显著升高(P＜0.05)；cyclin D1和c-myc mRNA的表达量显著升高(P ＜0.05); GSK3β蛋白水平表达无明显变化(P＞0.05),p-GSK3β、β-catenin、cyclin D1和c-myc蛋白的表达水平显著升高(P＜0.05).结论 成功筛选出稳定表达HBx的肝前体细胞株,HBx通过活化Wnt/β-catenin信号途径促进肝前体细胞的增殖.
