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甲状旁腺激素间歇性应用对大鼠成骨细胞分泌组的影响
目的 利用蛋白质组学技术研究甲状旁腺激素(PTH1-34)对大鼠成骨细胞分泌组的影响,为进一步研究唧促成骨作用机制、寻找新的骨代谢调节因子打下基础.方法 将大鼠成骨细胞分为PTH刺激组和对照组分别培养,收集第三周期6h末和24h末的无血清培养液,用透析-丙酮沉淀法富集培养液中的分泌蛋白质,然后通过双向电泳寻找差异蛋白,再通过质谱分析和数据库检索鉴定两组样品中差异蛋白的种类和性质.结果 6h末和24h末PTH刺激组的分泌组均有明显改变,初步鉴定其中23个差异表达蛋白,发现它们分别属于细胞骨架蛋白、翻译调控相关蛋白、蛋白降解相关蛋白、信号转导相关蛋白、热休克蛋白/分子伴侣、抗氧化酶、胰岛素样生长因子结合蛋白及与糖、脂代谢相关的酶等.结论 PTH间歇性应用可使成骨细胞分泌组发生明显改变,这些蛋白可能与PTH促成骨作用相关,本研究为进一步研究PTH促成骨机理、寻找新的骨代谢调节因子提供了实验依据.
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大鼠成骨细胞分泌组双向电泳样品制备方法的建立
目的:建立适用于体外培养大鼠成骨细胞分泌组的双向电泳样品制备方法,为进一步开展成骨细胞分泌组研究奠定基础.方法:分别采用透析法、透析-三氯乙酸(trichloractetic acid,TCA)-丙酮沉淀法和透析-丙酮沉淀法富集无血清培养液中的细胞分泌蛋白质,通过比较双向电泳的结果优选佳的样品制备方法.结果:透析-丙酮沉淀法较为理想,蛋白丢失少、溶解性佳,所得双向电泳图谱清晰,分辨率高.结论:透析-丙酮沉淀法更适用于制备体外培养的大鼠成骨细胞分泌组的双向电泳样品,可以满足进一步研究的需要.
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脂肪间充质干细胞分泌组对颅脑创伤后大鼠神经功能的影响
目的 研究脂肪间充质干细胞分泌组(Adipose-derived mesenchymal stem cells seeretome,ASC-ST)对大鼠颅脑创伤(Traumatic brain injury,TBI)后神经功能的影响及其潜在的机制.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为3组,假手术组(Sham组)、单纯TBI组(TBI组)和TBI后静脉注射ASC-ST组(TBI+ ST组),每组15只.Sham组只开骨窗,TBI组大鼠在eCCI打击后每日经尾静脉注射0.3 mL生理盐水,TBI+ ST组在打击后相同时问点经尾静脉注射0.2 mLASC-ST和0.1 mL生理盐水,连续注射7d.在TBI后10 ～ 14 d对各组大鼠进行水迷宫实验检测高级神经功能;在TBI后7d和14 d对TBI和TBI+ ST组大鼠行头颅MRI,DTI扫描,测量FA值评估神经纤维损伤;检测损伤周围皮层中Bcl-2和Bax蛋白的含量;并在TBI后14 d用免疫荧光检测损伤周围皮层NeuN+神经元的含量.结果 在TBI后,TBI和TBI+ ST组大鼠寻找平台的潜伏期显著高于Sham组(P＜0.05),在TBI后14 d,TBI+ ST组大鼠的潜伏期显著低于TBI组,当去掉平台后,其在60 s内穿过平台位置的次数显著高于TBI组(P＜0.05),但与Sham组无显著差异.在TBI后7d,TBI+ ST组大鼠损伤周围皮层FA值较TBI组高,Bcl-2的含量显著高于TBI组、Bax的含量则低于TBI组,但Bcl-2和Bax的含量均显著高于Sham组.而在TBI后14 d,TBI+ ST组大鼠损伤周围皮层FA值与TBI组无显著差异,但损伤对侧皮层、双侧胼胝体的FA值均高于TBI组(P＜0.05);损伤周围皮层只有Bax的含量显著低于TBI组(P＜0.05),且与Sham组无显著差异.同时,在TBI后14 d,TBI+ ST组大鼠损伤周围皮层中NeuN+细胞显著多于TBI组(P＜0.05).结论 ASC-ST能够通过减少神经细胞坏死凋亡及减轻神经纤维损伤改善大鼠TBI后的神经功能预后.
