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VEGF通过MAPK途径上调MC3T3-E1及C2C12细胞中Cbfal基因的表达
目的 研究生长因子VEGF对Cbfal的调节作用及其与MAPK信号传导通路的关系.方法 采用瞬时转染技术和RT-PCR方法.结果 在MC3T3-E1细胞中,VEGF(1×10-8～1×10-6g·L-1)作用24小时能够增加Cbfal基因启动子活性,相对荧光素酶活性分别为对照组的1.29(P<0.05),1.28(P<0.01)和1.40(P<0.05).而加入PD98059(10μmol/L)后不但抑制了Cbfal基因启动子活性的基础表达,而且完全阻断了VEGF所诱导的Cbfal基因启动子活性的增加(P<0.05).C2C12细胞中不同浓度的VEGF处理组,其相对荧光素酶活性与对照组相比未见显著性差异.MC3T3-E1细胞中,VEGF处理前后,MC3T3-E1细胞中Cbfal基因mRNA的表达水平未见显著变化.C2C12细胞中,VEGF处理后,第2天和第3天Cbfal基因mRNA的表达由处理前的32.63±4.41,分别增加至46.56±2.70(P<0.01)和50.35 ±5.62(P<0.05).PD98059阻断了C2C12细胞中VEGF对Cbfal基因mRNA表达的上调作用.结论 VEGF部分通过MAPK信号传导通路增加MC3T3-E1和C2C12细胞中小鼠Cbfal基因启动子活性及mRNA的表达.
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靶向PPARγ基因RNA干扰对激素抑制家兔骨髓基质细胞成骨分化的影响
目的:观察靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因RNA干扰阻断激素作用保持骨髓基质细胞(MSCs)成骨分化的作用.方法:选用家兔第2代MSCs,随机分为7组.对照组(C):无特殊处理;模型组(M):给予10-7 mol/L地塞米松;感染空载体组(O):给予空载体腺病毒1 × 105 U和地塞米松;感染无关siRNA组(N):给予无关序列siRNA腺病毒1×105 U和地塞米松;干扰1、2、3组(I1、I2、I3):分别给予靶向PPARγ siRNA 1、2、3腺病毒1 × 105 U和地塞米松.7d后采用RT-PCR技术检测各组细胞中PPARγ mRNA和核心结合因子 al(Cbfal) mRNA表达.14 d后测定各组培养液骨钙素含量和细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性.结果:M组、O组和N组PPARγ mRNA呈高表达,cbfal mRNA呈低表达,骨钙素含量和ALP活性均下降,与C组比较差异均有统计学意义(P均<0.05).I1组、I2组、I3组PPARγ,mRNA呈低表达,Cbfal mRNA呈高表达,骨钙素含量和ALP活性均接近C组,与C组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论:靶向PPARγ基因RNA干扰能够阻断激素作用,下调PPARγ基因表达,上调Cbfal基因表达,保持细胞的正常成骨分化.
