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骨髓基质细胞移植在中枢神经系统疾病中的应用
骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)具有多潜能性,在一定条件下可向神经细胞方向分化,,研究表明外源性BMSC移植入脑内后可以存活,迁移,并表现神经细胞形态,表达其特异性标记物,这种潜能提示BMSC可以用于神经系统疾病的细胞治疗,达到损伤修复或功能重建的目的.
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淫羊藿苷对高糖培养条件下大鼠颌骨骨髓基质细胞成骨能力的影响
目的：探讨淫羊藿苷对高糖培养条件下大鼠颌骨骨髓基质细胞成骨能力的影响。方法选取2015年6月—2016年4月黑龙江省医院实验室的8只大鼠，实验分组(每个基因进行5个复孔平行实验)∶正常组(2%胎牛血清+DMEM培养的细胞)，高糖组(2%胎牛血清+高糖-DMEM培养的细胞)，淫羊藿苷组1(2%胎牛血清+DMEM+淫羊藿苷培养的细胞)，淫羊藿苷组2(2%胎牛血清+高糖-DMEM +淫羊藿苷培养的细胞)，每组进行5个复孔平行实验。荧光定量测定成骨相关基因BMP2、OPN、BSP基因的表达。结果淫羊藿苷组1(1.78±0.10)与其它组比较∶BMP2(1.37±0.04)、OPN(1.38±0.09)、 BSP(1.50±0.05)基因的表达均高于其相应的对照组(P<0.05)。结论淫羊藿苷对高糖培养条件下大鼠颌骨骨髓基质细胞成骨能力有加强作用。
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体外诱导兔骨髓基质细胞向心肌样细胞方向分化
目的:用兔骨髓基质细胞体外由5-氮胞苷诱导,使其定向分化,以获取心肌样细胞.方法:抽取兔骨髓后,体外培养、传代得到骨髓基质细胞,用5-氮胞苷(5-azacytidine)诱导24 h,继续培养10天后,行免疫组织化学和RT-PCR鉴定.结果:诱导后部分细胞出现形态学改变,心肌特异性肌钙蛋T(cardiacisoformofTropnin T,cTnT)、α横纹肌肌动蛋白(α-Sarcomericactin)免疫组织化学染色阳性.RT-PCR表明诱导后细胞表达心肌特异性β肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain).讨论:骨髓间质细胞在体外5-氮胞苷诱导下部分可向心肌细胞方向分化,但分化的阳性率还不高,需要进一步研究.
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经静脉神经干细胞移植治疗难治性癫痫的实验研究
目的:观察难治性癫痫模型静脉注射骨髓基质细胞后行为学及细胞形态学的改变,为难治性癫痫的临床治疗开辟新的途径,奠定理论基础.方法:将20只SD大鼠随机分模型组(A组)、移植组(B组),每组10只.在大脑立体定向仪上定位大鼠大脑海马CA3区,用微量进样器缓慢注入KA 1μl,制成难治性癫痫模型,然后B组经尾静脉注入Hoeschst33342标记的骨髓基质细胞1ml.取A组、B组鼠脑做HE切片,观察细胞形态学变化.结果:模型组的病理改变表现为海马周围卫星灶形成,腔隙层、辐状层和锥体细胞层有神经元吞噬现象,神经元缺失,其中CA3区表现得为明显,齿状回苔醉状纤维出芽进行性增加.移植组较模型组海马周围卫星灶变小,细胞间隙较移植前减小,细胞增多且排列较整齐.结论:骨髓基质细胞具有修复癫痫病灶的能力.
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骨髓基质细胞与可降解明胶-聚羟基丁酸酯膜复合培养的生物合成功能分析
目的:从生物合成功能角度,探讨骨髓基质细胞(BMSCs)与可降解明胶-聚羟基丁酸酯(G-PHB)膜复合培养的生物相容性.方法:以BMSCs分别与G-PHB、聚羟基丁酸酯(PHB)、明胶(G)膜材料复合培养,并设立空白对照组,各组通过3H-TdR法检测DNA合成;考马斯亮蓝法检测蛋白质合成;对硝基苯磷酸盐法(PNP)测定碱性磷酸酶(ALP)水平;放免法测定骨钙素(OCN)表达;流式细胞术测定纤维连接蛋白(FN)表达.结果:G-PHB组DNA合成优于PHB组和空白对照组(P＜0.05).总蛋白合成与各对照组无显著性差异(P＞0.05),但成骨特异性标志ALP、OCN以及细胞黏附指标FN均明显优于其他各组(P＜0.05).结论:G-PHB材料对于种子细胞BMSCs黏附、增殖与成骨定向分化有明显的促进作用,是一种有效上调细胞生物合成功能的新型可降解材料.
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兔骨髓基质细胞和骨血肿块移植促进骨折愈合的研究
目的:研究骨折后骨血肿块和骨髓基质细胞的骨再生潜能,以及骨血肿块和骨髓基质细胞联合移植对骨折愈合的影响,探讨促进骨折愈合的新途径.方法:在新西兰兔胫骨上制造骨缺损模型,3 d后取出骨血肿,并从股骨抽骨髓血分离出骨髓基质细胞,将骨髓基质细胞联合骨血肿块回植到实验组骨缺损区;对照组骨缺损医则单纯行骨血肿块回植.定期拍X线片和取出骨痂行组织学观察.结果:骨缺损处骨痂生成数量在实验组和对照组两组间有显著性差异,骨髓基质细胞联合骨血肿块移植组的骨痂形成数量和骨膜反应明显多于以单纯骨血肿块移植组;组织学观察:实验组成骨样细胞形成数量也明显多于对照组.结论:骨髓基质细胞有较强的骨再生潜能,骨髓基质细胞和骨血肿块联合移植比单纯骨血肿移植成骨效果更好.
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成骨生长肽对大鼠骨髓基质细胞增殖和成骨分化的作用
目的:观察成骨生长肽诱导体外培养的大鼠骨髓基质细胞增殖及向成骨分化的作用.方法:取6周龄SD大鼠,贴壁法分离培养骨髓基质细胞,在不同浓度成骨生长肽的诱导下,观察细胞形态变化,绘制骨髓基质细胞生长曲线,碱性磷酸酶和钙结节组织化学染色.结果:成骨生长肤对骨髓基质细胞增殖和成骨分化的作用呈剂量依赖性:成骨生长肽浓度在10-10及10-11mol/L时促进骨髓基质细胞增殖,而在10-8及10-9mol/L时对骨髓基质细胞的增殖略有抑制作用;成骨生长肽浓度在10-10及10-11mol/L时骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色基本呈阴性,与对照组相比差异无统计学意义,而在10-8及10-9mol/L浓度下可以显著提高骨髓基质细胞碱性磷酸酶染色的阳性率.结论:成骨生长肽可以明显促进大鼠骨髓基质细胞灾出及向成骨细胞分化,其促成骨活性具有显著的浓度依赖性.
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种植转染VEGF165基因骨髓基质细胞的脱蛋白异体骨在裸鼠体内的成骨
目的:探讨脱蛋白骨支架种植转染血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)165基因的骨髓基质细胞体内的成骨作用.方法:从狗的髂骨穿刺骨髓分离骨髓基质细胞,应用脂质体转染VEGF165基因,以RT-PCR检测转染的基因表达.随机选取4周龄BALB/C裸鼠30只,随机分为3组,各组10只.实验组A为脱蛋白骨+转染pcDNA3-hVEGF165基因的骨髓基质细胞;实验组B为脱蛋白骨+骨髓基质细胞;对照组C为单纯植入脱蛋白骨+DMEM.在脊柱两侧分开肌间隙,每只裸鼠植入2块脱蛋白骨材料至肌腹内.术后4、8周处死取材,经大体观察、组织形态学与免疫组化方法检查细胞材料复合物植入后的成骨作用及VEGF表达.结果:组织学检查A、B组均有成骨,并随时间延长而新骨增多,但其中转基因的A组其成骨作用明显,并在植入4周后免疫组化可见VEGF表达呈阳性;对照组C无成骨现象.结论:转染VEGF165基因骨髓基质细胞复合脱蛋白骨在体内具有较好的成骨作用.
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骨髓基质细胞在椎间盘退变中的应用
骨髓基质细胞具有很强的自我更新和多向分化潜能,在不同体外环境下,可诱导多胚层来源的细胞,如:骨细胞、软骨细胞、神经细胞等.椎间盘退变是脊柱退行性疾病及继发病变的基础,临床上十分多见,目前的治疗方法虽然很多,但均不是真正针对椎间盘退变的病理生理过程.骨髓基质细胞的细胞治疗和基因治疗作为椎间盘退变治疗的一种新方法,从根本上阻止和逆转椎间盘退变,必将成为治疗椎间盘退变的佳途径.
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rhBMP-2对兔骨髓基质细胞VEGF表达及成骨潜能的影响
目的:观察经不同剂量重组人骨形态发生蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)刺激后的兔骨髓基质细胞(marrow stromal cell,MSC),其血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达及成骨潜能变化的情况.方法:取兔双侧股骨骨髓基质细胞体外培养,分别以不同剂量rhBMP-2刺激细胞,并设立空白对照组.培养5 d后,进行细胞形态(HE染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(组化染色与活性测定)、钙化结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测.结果:不同剂量组间在碱性磷酸酶活性、矿化面积百分率、VEGF阳性细胞率三项观测指标上差异显著,rhBMP-2剂量为100 ng/ml左右时效果佳;在细胞记数与MTT检测上各组差别不显著.结论:应用rhBMP-2在促进基质细胞成骨潜能的同时,还可促进VEGF的表达,其应用剂量与效果之间存在明显相关关系,应用剂量为100 ng/ml左右时,其促进VEGF表达及成骨潜能作用同时达到佳效果,超过此应用剂量,两者则有下降趋势.应用rhBMP-2对促进骨髓基质细胞增殖无明显影响.
关键词： 血管内皮细胞生长因子 重组人骨形态发生蛋白-2 骨髓基质细胞 细胞 培养的 -
黄精多糖干预长春新碱抑制骨髓基质细胞增殖的研究
目的:探讨黄精多糖(PSP)促进小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长及干预长春新碱(vCR)对小鼠BMSCs增殖的抑制.方法:①PSP0.5、1.0、2.0、4.0g/L,以及VCR 2.5、5.0、10、15mg/L分别与骨髓单个核细胞(BMMCs)共同培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖.②PSP 0.5、1.0、2.0、4.0g/L与BMMCs预培养2h后再分别加入终浓度为5.0mg/L的VCR继续培养14d,应用MTT法测定BMSCs增殖.结果:BMSCs培养14d后,PSP 1.0、2.0、4.0g/L组的OD值(3.80、4.48、4.05)均高于正常对照组(3.70),其中PSP 2.0g/L组OD值与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).VCR 5.0、10.0、15.0mg/L3组0D值(2.36、1.83、1.67)均显著低于正常对照组(3.70)(P＜0.05).BMSCs培养第14d PSP 2.0g/L+VCR 5.0mg/L组0D值(3.51)与VCR 5.0mg/L组0D值(2.62)比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:VCR明显抑制BMSCs生长;PSP可促进BMSCs生长,且干预vCR对BMSCs增殖的抑制.
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肌萎灵注射液对人骨髓基质细胞增殖和向神经细胞分化的影响
目的:观察肌萎灵注射液对人骨髓基质细胞增殖及向神经细胞分化的影响,为中医药与干细胞移植联合治疗运动神经元病提供实验依据.方法:应用密度梯度离心方法,体外分离培养人骨髓基质细胞,实验组施加不同浓度的肌萎灵注射液(0.1%、0.2%、0.5%、1%、2% JWL),对照组加等量培养基.应用液体闪烁法检测细胞增殖,免疫组织化学方法和流式细胞仪检测骨髓基质细胞分化后神经元特异中间丝蛋白(NF-200)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况.结果:肌萎灵注射液各浓度组人骨髓基质细胞生长较好,细胞增殖迅速,3H-TdR掺入法CPM显著提高,与对照组均有显著性差异(P＜0.01).人骨髓基质细胞在加入含血清培养基的情况下,对照组自然分化成神经元和胶质细胞数目很少,分别仅占5.85%±1.03%和8.90%±1.44%.肌萎灵注射液各剂量组NF-200和GFAP阳性细胞数均明显增多,与对照组有显著性差异(P＜0.01).结论:肌萎灵注射液明显促进人骨髓基质细胞的增殖和向神经细胞的分化.
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补肾化痰活血法促进再生障碍性贫血小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达的影响
目的:观察和比较补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓基质细胞黏附分子VCAM-1(CD106)、HCAM(CD44)、PECAM-1(CD31)表达的影响.方法:建立再障小鼠模型,各组小鼠分别胃饲生理盐水、补肾化痰活血中药、康力龙和再障生血片,连续喂养14d后,采集骨髓进行骨髓基质细胞培养,应用流式细胞仪检测骨髓基质细胞黏附分子表达水平.结果:模型组小鼠骨髓基质细胞黏附分子CD106、CD44、CD31表达水平均低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓基质细胞黏附分子CD106、CD44、CD31表达水平均明显提高,差异均有显著性,补肾化痰活血疗效优.结论:补肾化痰活血中药可能通过提高再障小鼠骨髓基质细胞黏附分子CD106、CD31、CD44表达水平,从而增强造血细胞黏附定位于发育的骨髓微环境,改善骨髓造血功能.
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益气活血方治疗恶性肿瘤放射损伤的临床及实验研究
目的:研究益气活血对肿瘤放射损伤的疗效及作用机理.方法:166例恶性肿瘤患者行放疗,治疗组86例加益气活血中药,与80例单纯放疗(对照组)比较,并进行X线照射观察80只小鼠股骨骨髓基质细胞集落(CFU-F)形成情况.结果:临床近期有效率(CR+PR)治疗组、对照组分别为66.3%、43.8%.治疗组治疗后患者生存质量、免疫功能、外周血象、T细胞亚群明显增高(P＜0.01),动物实验结果显示益气活血能减轻放射对骨髓的损伤.结论:益气活血中药对恶性肿瘤患者的放射损伤有一定的防护作用.
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四物汤对人骨髓基质细胞蛋白质表达的作用
目的:考察四物汤对骨髓基质细胞HFCL增殖及蛋白质表达的影响,探讨四物汤补血作用的分子机制.方法:分别用MTT法、流式细胞术和蛋白质组学方法测定四物汤对HFCL增殖、细胞周期及蛋白质表达的影响.结果:四物汤能促进HFCL的增殖,提高其增殖指数,并使HFCL的12种蛋白质表达上调,5种下调.结论:四物汤能促进HFCL增殖,作用于多个蛋白质靶点,间接发挥补血作用.
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刺五加注射液体外诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的机制研究
目的:研究核因子-κB(NF-κB)在刺五加诱导骨髓基质细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的作用.方法:试验分对照组和刺五加诱导组.采用倒置显微镜观察细胞形态;免疫荧光检测MSCs表型、诱导后神经细胞标记蛋白表达和NF-κB亚基p65核移位情况;Western blot法检测诱导组、对照组IκBα的表达.结果:刺五加诱导1 h,可见部分细胞体积缩小,立体感增强,胞体收缩成锥形或球形;诱导5 h,较多细胞成三角形或球形,细胞微丝收缩,伪足形成细长突起,局部交织成网,部分细胞脱落、死亡.诱导7 d,多数细胞成锥形、三角形、球形,交织成网,形成较典型的神经元样细胞.对照组5 h时细胞无明显形态变化,7 d时偶见锥形细胞.免疫荧光检测到诱导组诱导1 h时nestin表达即为强阳性,到第7天仍为阳性,而β-Ⅲ Tubulin在第1小时为弱阳性,3,5 h则为强阳性,并持续到7 d仍为阳性.神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)在第3小时为弱阳性,第5,7天则为强阳性,未见胶质细胞标记蛋白GAFP的表达;对照组各标记蛋白表达均为阴性或可疑或弱阳性.对照组出现p65由胞浆向胞核移位,而诱导组p65信号主要仍在胞浆中表达.Western blot发现诱导前IκBα蛋白相对IA为1.0,诱导后刺五加组IκBα蛋白相对IA为0.455 6±0.100 8,较诱导前明显下降(P<0.01).诱导后对照组IκBα蛋白相对IA为0.0296±0.0099,较诱导前及诱导组明显下降(P<0.01).结论:刺五加可诱导MSCs分化为神经元样细胞.在此过程中,刺五加可以抑制NF-κB的活化.
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人参单药及其组分对造血影响的基础研究与临床应用
人参药理研究发现其含有皂苷、糖类等多种成分,主要成分为人参皂苷,目前已知40余种人参皂苷单体成分.临床常用来治疗血虚证,但其作用机制并不明确.现就人参皂苷及其组分对正常造血影响的基础研究及临床应用作一综述,发现其对造血细胞、造血微环境及造血调控因子均有作用,提示其对血细胞减少的预防、放化疗保护甚至造血干细胞移植均有潜在的应用价值.
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核因子-κB在黄芩甙诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞中的作用
目的研究核因子-κB(NF-κB)在黄芩甙诱导骨髓基质细胞分化为神经细胞中的作用.方法在无血清条件下,以中药单体黄芩甙作为主要诱导剂,诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经细胞;同时以无血清培养基为对照组.采用免疫荧光细胞化学染色检测神经细胞标记蛋白表达和NF-κB亚基P65核移位情况;蛋白质印迹(Western blot)检测细胞中NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达变化;原位末端标记(TUNEL法)染色评价细胞凋亡率.结果黄芩甙诱导后细胞形成较典型的神经细胞形态,同时表达多种神经细胞标记蛋白.对照组无类似情况,但出现P65由胞浆向胞核移位,细胞内IκBα表达水平显著降低,细胞凋亡率为(28.2±6.1)%;黄芩甙诱导后P65信号主要仍在胞浆中表达,细胞内IκBα表达水平降低程度较少,细胞凋亡率[(12.2±2.8)%],也显著低于对照组(P＜0.01).结论黄芩甙可抑制NF-κB的活化,在骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的过程中可能起到一定的作用.
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兔骨髓基质细胞源性神经干细胞诱导分化及移植修复脊髓损伤实验研究
目的:探究骨髓基质源性神经干细胞对于修复脊髓损伤的可行性和可靠性.方法:采用新西兰白兔作为研究对象,提取骨髓基质细胞加以培养分化,手术方式将骨髓基质细胞源性神经干细胞悬浊液移植到脊髓损伤部位,观察损伤区域再生情况.结果:早期培养细胞在无诱导分化时能表达巢蛋白,表明其有干细胞活性;干细胞移植后脊髓损伤部位增殖细胞排列无层次,且BrdU染色呈阳性.结论:兔骨髓基质细胞在合适的体外培养条件下能分化成干细胞,具有增殖分化能力,可以应用于修复脊髓损伤等神经学科领域.
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刺五加注射液体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞的佳浓度探索
目的 探讨刺五加注射液体外诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞的佳浓度.方法 体外密度梯度法分离培养骨髓基质细胞,以不同浓度刺五加注射液对其进行体外诱导,用MTT法检测各组细胞生长情况,用免疫细胞化学方法计算各组神经样细胞阳性数加以比较.结果 用不同浓度刺五加注射液诱导后均可表现为典型的神经样细胞形态,其中0.3mg/ml组和0.4mg/ml组细胞生长情况与免疫组化结果均与其余各组差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 刺五加注射液体外诱导成年大鼠骨髓基质细胞分化为神经样细胞以0.3～0.4mg/ml浓度佳.
