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酶联免疫斑点技术检测结核分枝杆菌RD1抗原刺激后释放γ干扰素的T细胞在结核病诊断中的应用
结核病一直是全球莺要的公共卫生问题之一,世界人口的1/3为潜伏结核感染者,每年约有200万人死于结核病[1].我国是结核病大国,结核病导致的死亡人数是其他传染病总死亡人数的2倍以上[2].2000年第四次全国结核病抽样调查显示,我国活动性肺结核的患病率为367/10万,其中77%为涂阳或菌阳病例,PPD阳性率为44.5%[3].
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磷酸二酯酶6b基因异常表达对视网膜色素变性的作用
磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)是一个大家族,包括11个亚家族,即PDE1~PDE11.而PDE6是PDEs亚家族中的一种,由PDE6基因编码的PDE蛋白,水解cGMP,cGMP是视杆细胞外节膜盘离子通道的特异性受体,同时cGMP也是脊椎动物中感光细胞将光信号转化为电信号的重要分子.PDE6b基因的缺失使感光细胞内cGMP增多,引起感光细胞的阳离子增多,细胞中毒而坏死,视网膜的感光细胞不断破坏,从而间接影响到视网膜接受光信号转换为电信号.PDE6b基因异常是常染色体隐性遗传视网膜色素变性主要的原因之一,因此对于PDE6b基因表达异常在动物模型及家族遗传逐渐成为近年来研究的热点.该文将重点阐述PDE6b基因的结构、功能和突变类型对视网膜色素变性相对应结构及其功能的影响.
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RD1/ESX-1分泌系统与结核分枝杆菌的毒力和致病性
结核分枝杆菌(MTB)全基因序列测定的完成和比较基因组学的发展,使得对MTB毒力和致病机制的认识不断深入,近年发现RDI区在MTB的致病机制中充当重要角色,而RDI区编码的ESX-1蛋白组成的分泌转运系统与MTB的毒力关系密切.此文主要从MTB RD1/ESX-1蛋白分泌转运系统对ESAT-6/CFP-10分泌输出的影响,探讨其与MTB的毒力和致病机制的关系.
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血小板源性生长因子-C蛋白在视网膜光感受器细胞损伤模型中的神经保护作用
[目的]探讨血小板源性生长因子-C(PDGF-C)蛋白治疗对视网膜光感受器细胞损伤模型中的神经保护作用.[方法]①检测体外条件下PDGF-C的作用,使用光感受器细胞系661W细胞及原代培养的Pde6brd1视网膜细胞.在体外培养的661W细胞培养液中加入PDGF-C蛋白或者牛血清蛋白(BSA),分别予以同等强度相同时间长短的紫外线照射,然后做MTT检测其细胞凋亡状况,检测PDGF-C蛋白对661W细胞的保护作用.取Pde6brd1小鼠视网膜做原代细胞培养后,在培养液中分别加入PDGF-C蛋白或BSA,相同条件培养后通过免疫荧光染色检测光感受器细胞的生存情况,以检测PDGF-C蛋白对该原代细胞的保护作用.②检测在体条件下PDGF-C的作用,在Pde6brd1小鼠的视网膜下分别注射PDGF-C蛋白及BSA,然后通过组织切片后苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜光感受器细胞数量的变化来检测PDGF-C的神经保护作用.[结果]在紫外线诱导的视网膜光感受器细胞661W损伤模型中,培养液中加入PDGF-C蛋白的实验组中,MTT实验显示490nm吸光度(0.2857±0.054)较对照组(0.1726±0.005)增高,P＜0.05.在Pde6brd1原代培养的视网膜细胞中,PDGF-C蛋白组中光感受器细胞的存活率明显高于对照组,P＜ 0.05.在Pde6brd1小鼠的视网膜下注射PDGF-C蛋白,实验组外核层中的每100 μm细胞计数(38.4769±6.1)较对照组(27.2435±5.3)增加,P＜ 0.05.[结论]PDGF-C蛋白在光感受器细胞损伤模型中具有较强的神经保护作用.
关键词： 血小板源性生长因子-C RD1 光感受器细胞 661W细胞 -
结核分枝杆菌RD1区Rv3873基因真核表达载体的构建及鉴定
[目的]构建结核分枝杆菌RD1区Rv3873基因的真核表达载体pcDNA3.1-Rv 3873.并对其进行鉴定.[方法] 利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Rv3873基因,并将其定向克隆至原核载体pGEX-4T-1中,经测序鉴定后,将重组质粒pGEX-4T-1-Rv3873中的目的基因亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建重组子pcDNA3.1-Rv3873,通过限制性内切酶切酶及PCR进行鉴定. [结果]克隆的Rv3873基因序列与GenBank公布的一致性为100%,限制性内切酶酶切及PCR分析表明Rv3873已成功插入pcDNA3.1(+)中. [结论]成功构建了Rv3873基因真核表达载体,为进一步研究新型结核杆菌DNA疫苗奠定了基础.
