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辛伐他汀体外促进骨形成作用的初步研究
目的研究辛伐他汀(Simvastatin)对成骨细胞分化、增殖及骨形成的作用.方法用RPMI1640培养液分别对水囊引产胎儿及新生大鼠颅顶骨进行组织培养,并将等量的胎儿或大鼠的颅顶骨骨组织分为实验组(辛伐他汀1 μmol/L)和对照组,除动态观察比较不同培养液中成骨细胞的增殖状况外,将培养7 d后的颅顶骨组织块制成半薄或超薄病理切片,于光镜下和电镜下进行形态学观察,并用测微尺测量新生骨组织厚度,记录成骨细胞数;同时,对留取的培养液测定其中的碱性磷酸酶(AKP)及骨钙素(BGP)的含量.结果在培养过程中,可见实验组胎儿和新生大鼠颅骨成骨细胞生长活跃,数量多;对照组成骨细胞生长缓慢,数量少,可见大量成纤维细胞.培养7d后可见实验组胎儿及大鼠颅骨新生骨组织的厚度均明显高于对照组(P＜0.01);其单位长度(0.3 mm)新生骨组织内成骨细胞数均明显高于对照组(P＜0.01).透射电镜下可见实验组成骨细胞处于活化状态,胞浆内有丰富的细胞器,少见破骨细胞,而对照组成骨细胞处于衰老状态,细胞器少见,可见大量破骨细胞.实验组培养液中AKP及BGP均明显高于对照组(P＜0.01).结论辛伐他汀在体外实验中具有促进成骨细胞分化、增殖和促进新骨形成的作用;他汀类药物可作为预防、治疗骨质疏松症的有价值的候选药物.
关键词： 辛伐他汀 成骨细胞 骨形态发生蛋白2(BMP-2) 骨形成 骨质疏松症 -
腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1的构建和鉴定
目的构建腺病毒穿梭质粒pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1,为构建表达具有抗原表位标记的骨形态发生蛋白2(bone morpbogenetic protein 2,BMP-2),并同时表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)报告分子的腺病毒真核细胞表达载体打下基础.方法对目的基因供体质粒pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因测序和序列内部存在的限制性内切酶识别位点进行分析,利用PCR(polymeras chain reaction,PCR)技术对pcDNA3-BMP2携带的BMP2基因突变,以去除翻译终止密码子后的基因序列并添加新的酶切识别位点Xho Ⅰ.测序检测突变情况,将突变后的BMP2基因(BMP2+基因)定向连入腺病毒穿梭质粒pShuttleCMV-IRES-hrGFP-1,通过限制性内切酶酶切图谱分析鉴定获得的重组质粒.结果重组质粒经双酶切鉴定图谱正确.结论成功构建了pShuttle CMV-BMP2+-IRES-hrGFP-1.
关键词： 腺病毒穿梭载体 骨形态发生蛋白2(BMP-2)
