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CD40作为脊柱结核靶向治疗靶标分子的实验研究
目的:通过对不同感染复数结核分枝杆菌侵染的正常人成骨细胞表面CD40分子差异表达的实验研究,探讨CD40作为脊柱结核分子靶向治疗的靶标分子的可行性.方法:将冷冻保存的正常人成骨细胞按照美国模式菌种收集中心(American Type Culture Collection,ATCC)的说明进行复苏和培养,传代至3代冻存备用;之后选择Middlebrooke7H9液体培养基对荧光结核分枝杆菌(H37Ra-GFP)进行培养,培养至对数中期备用.把传代后的人成骨细胞随机分为A、B、C、D四组,A组为对照组,是未被结核分枝杆菌侵染的人成骨细胞组;B、C、D三组均为实验组,分别是被感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1:1000、1:100、1:10浓度的结核分枝杆菌侵染的人成骨细胞组.然后采用实时定量PCR与蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)的方法,分别检测不同感染复数结核分枝杆菌诱导人成骨细胞中CD40 mRNA的表达变化及成骨细胞表面CD40分子的表达变化.结果:传代后的人成骨细胞经荧光结核分枝杆菌侵染后,观察发现各组细胞感染程度良好.A组实时定量PCR反应结果表现为人成骨细胞中存在CD40 mRNA的表达;A (1.0337±0.0715)、B(1.4083±0.1145)、C(1.7172±0.1294)、D(2.0378±0.1573)四组之间的表达存在差异(F=74.005,P＜0.05);B、C、D三组分别与A组相比时,均存在差异(P＜0.05),表现为结核分枝杆菌侵染组B、C、D三组成骨细胞中CD40 mRNA的表达均高于未侵染组A组;B、C、D三组,两两比较时,均存在差异(P＜0.05),表现为从B组到D组成骨细胞中CD40mRNA的表达依次上调.而通过蛋白免疫印迹法分析成骨细胞表面CD40分子的表达结果发现与上述mRNA表达上调的结果完全吻合.结论:结核分枝杆菌侵染人成骨细胞后可诱导成骨细胞中CD40 mRNA以及成骨细胞表面CD40分子的表达增多,并且感染复数越高,细胞表面CD40分子的表达越多.而CD40分子可与其所对应的核酸适体特异结合,这就为使用CD40分子作为靶标分子,对脊柱结核进行靶向治疗提供了理论基础.
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动态组合化学的研究进展
作为组合化学中的新兴分支,动态组合化学是一种集合成与筛选为一体的组合化学研究新方法.在动态组合化合物库中,通过靶标分子的诱导结合驱动作用,能够选择性地筛选到与靶标分子存在强相互作用的优势化合物,因而动态组合化学在药物研发、材料化学等领域有着广泛的应用前景.本文在简单介绍动态组合化学原理和方法的基础上,着重介绍了动态组合化学的三要素,即靶点(生物酶、凝集素、核酸、有机分子、无机分子等)、涉及的化学反应(二硫化物化学、胺化还原反应、腙化学等)以及分析方法,并对现存限制因素和发展前景作了探讨.
