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microRNA-373在5-氟尿嘧啶抑制HepG2细胞增殖中的功能及作用机制研究
目的 研究5-氟尿嘧啶对肝癌细胞HepG2增殖的影响并探讨其可能的作用机制.方法 利用实时PCR方法分析microRNA-373(miR-373)在肝细胞癌组织及肝癌细胞中的表达水平,并检测经5-氟尿嘧啶处理的HepG2细胞miR-373的表达.利用蛋白印迹方法检测HepG2细胞转染miR-373模拟物或经5-氟尿嘧啶处理后,靶基因PPP6C的表达变化.设计拯救实验(Rescue assay)并利用CCK-8方法检测细胞增殖情况.结果 miR-373在肝细胞癌组织及细胞系中表达上调.与正常肝细胞对照比较,HepG2细胞miR-373上调2.94倍(P＜0.01).5-氟尿嘧啶可以有效抑制HepG2细胞内源性miR-373的表达水平(约50％,P＜0.01,48 h),并上调PPP6C的表达水平(约2.1倍,48 h).过表达miR-373可以阻遏5-氟尿嘧啶对HepG2细胞增殖的影响,CCK-8细胞增殖分析显示,细胞增殖分别恢复81％ (P ＜0.05,24 h)、84％ (P ＜0.01,48 h).结论 5-氟尿嘧啶可通过下调HepG2细胞内源性miR-373的表达,促进靶基因PPP6C蛋白表达,抑制细胞增殖.
关键词： 5-氟尿嘧啶 肝细胞癌 microRNA-373 细胞增殖 -
MiRNA-373在皮肤鳞状细胞癌的表达及对侵袭的影响
目的 分析microRNA-373 (miR-373)在皮肤鳞状细胞癌(鳞癌)组织和细胞中的表达,探讨对皮肤鳞癌细胞侵袭的影响.方法 实时PCR检测皮肤鳞癌组织和细胞中miR-373的表达,将miR-373模拟物、miR-373抑制剂以及阴性对照miRNA转染皮肤鳞癌A431细胞,采用细胞侵袭实验分析miR-373表达下调对细胞侵袭的影响,采用Western印迹分析miR-373表达下调对MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响.结果 皮肤鳞癌组织(2.465±0.218)和SCL-1细胞及A431细胞(1.864±0.178,2.919±0.277)中miR-373的表达水平显著高于瘤旁组织和细胞(1.000±0.000),差异有统计学意义(P＜0.05).在转移性的皮肤鳞癌患者(3.323±0.344)中,miR-373的表达显著高于非转移组(1.914±0.161),差异有统计学意义(t=4.158,P＜0.01).与未处理组和阴性对照组相比,miR-373模拟物显著增加皮肤鳞癌A431细胞中miR-373的表达水平和细胞的侵袭能力,而miR-373的抑制剂显著下调皮肤鳞癌A431细胞中miR-373的表达水平和细胞的侵袭,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 MiR-373表达下调显著抑制皮肤鳞癌A431细胞的侵袭,并能显著下调MMP-2和MMP-9蛋白的表达.
