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外周血CD14+单核细胞微RNA在结核分枝杆菌潜伏感染和肺结核中的差异表达
目的 分析结核分枝杆菌潜伏感染(LTBI)和肺结核患者外周血CD14+单核细胞微RNA(miRNA)表达谱的差异.方法 选择深圳市宝安区慢性病防治院和深圳市第三人民医院2013年6月至2014年2月收治的肺结核患者31例,同时选择上述医院体检科的LTBI者31例.从肺结核和LTBI人群中各挑选6例(男、女各3例)进行miRNA芯片检测,筛选出差异表达的miRNA.选取具有代表性的差异表达的miRNA,采用TaqMan qPCR检测验证其在两组人群(各25例)中表达的差异.应用受试者工作特征(ROC)曲线评价差异表达的miRNA诊断肺结核的价值.应用miRFocus靶基因预测集成数据库对差异表达的miRNA进行靶基因预测,并对预测的靶基因进行GO和KEGG通路分析.结果 与LTBI人群相比,肺结核患者CD14+单核细胞中表达上调2倍以上的miRNA有4个,表达下调2倍以上的miRNA有36个.对差异表达的miRNA进行聚类分析发现,差异表达的40个miRNA分子可分为2个基因簇.从2个基因簇中各选取一个具有代表性的miRNA分子(miR-378和miR-483-5p)进行TaqMan qPCR验证.结果显示,miR-378在肺结核患者中的表达水平为4.17 ±0.25,显著高于其在LTBI人群中的表达水平(2.31 ±0.24,=5.25,P＜0.01);miR-483-5p在肺结核患者中的表达水平为1.71±0.16,显著低于其在LTBI人群中的表达水平(2.97 ±0.15,t =5.45,P＜0.01).ROC曲线分析显示,miR-378诊断肺结核的敏感性为0.76,特异性为0.72;miR-483-5p诊断肺结核的敏感性为0.84,特异性为0.76.生物信息学分析显示miR-378和miR-483-5p的靶基因主要参与细胞增殖、凋亡、抗原提呈、信号转导等过程.结论 LTBI和肺结核人群外周血CD14+单核细胞miRNA表达谱存在显著差异,其中miR-378和miR-483-5p可以作为有效分子标识鉴别诊断两组人群.
