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微小核糖核酸miR3619-5p对膀胱癌细胞系EJ和T24细胞增殖的影响
目的 探讨微小核糖核酸miR-3619-5p对膀胱癌细胞系EJ和T24细胞增殖的影响.方法 2015年10月至2016年3月对膀胱癌细胞系EJ和T24细胞分别分为3组:阴性对照组转染随机序列dsControl,阳性对照组转染dsP21-322,实验组转染miR-3619-5p.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测3组细胞p21、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)以及细胞周期依赖性激酶(CDK4、CDK6)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测p21、CyclinD1、CDK4及CDK6蛋白的表达;流式细胞术测定3组的细胞周期分布;集落形成实验检测单个细胞克隆增殖情况;细胞增殖实验检测转染后各组细胞的增殖能力.结果 qPCR结果显示,阴性对照组EJ和T24细胞中p21、CyclinD1、CDK4、CDK6 mRNA的相对表达量△Ct分别为(11.4±1.3)和(12.8±1.6)、(5.8±1.2)和(6.2±1.2)、(4.1±0.8)和(7.8±1.2)、(9.7±1.1)和(10.8±1.2),实验组分别为(9.5±0.9)和(8.7±0.8)、(7.1±0.9)和(7.6±0.8)、(5.6±0.9)和(9.1±0.9)、(10.9±0.9)和(12.0±0.8),两组比较差异均有统计学意义(均P ＜0.05).蛋白质印迹法检测结果显示,实验组EJ和T24细胞中p21、CyclinD1、CDK4、CDK6蛋白相对表达量分别为(0.92 ±0.27)、(0.16±0.05)、(0.51±0.14)、(0.13±0.04)和(0.78±0.24)、(0.15±0.06)、(0.63±0.18)、(0.23±0.11);阴性对照组分别为(0.23±0.05)、(0.42±0.08)、(1.13 ±0.14)、(0.52±0.11)和(0.14 ±0.04)、(0.85±0.13)、(0.62±0.14)、(0.57±0.12),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测结果显示,实验组EJ和T24细胞中G0/G1期细胞比例分别为(56.64±1.10)％和(62.33±0.98)％,阳性对照组分别为(65.07±0.94)％和(70.46±1.56)％,阴性对照组分别为(46.48±1.03)％和(65.07±0.94)％,实验组和阳性对照组与阴性对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).细胞集落形成实验结果显示,阳性对照组EJ和T24细胞集落形成相对数量分别为(0.102±0.013)和(0.089±0.011),实验组分别为(0.119 ±0.012)和(0.110 ±0.013),阴性对照组分别为(0.218 ±0.016)和(0.210±0.017),实验组和阳性对照组与阴性对照组比较差异均有统计学意义(均P ＜0.05).细胞增殖实验结果显示,实验组EJ和T24细胞转染48 h、72 h、96 h的吸光度A值分别为(0.661 ±0.072)、(0.911 ±0.118)、(1.057 ±0.107)和(0.672 ±0.063)、(0.990 ±0.096)、(1.138 ±0.095),阳性对照组分别为(0.705±0.087)、(0.900±0.092)、(1.055 ±0.127)和(0.704 ±0.087)、(0.975 ±0.119)、(1.118±0.071),阴性对照组分别为(0.812 ±0.079)、(1.052 ±0.083)、(1.450±0.097)和(0.858 ±0.058)、(1.195±0.059)、(1.474±0.102),实验组和阳性对照组与阴性对照组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR3619-5p可以通过上调p21蛋白的表达,将细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制膀胱癌细胞的增殖作用.
