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微流控芯片特异性筛选膀胱癌循环肿瘤细胞的研究
目的 构建膀胱癌循环肿瘤细胞特异性筛选平台,实现对膀胱癌循环肿瘤细胞的高特异性筛选.方法 2015年5月至2016年4月借助微流控技术设计并制作膀胱癌循环肿瘤细胞特异性筛选芯片.通过设计芯片、制作光刻阳膜、用聚二甲基硅氧烷制作基片、修剪、打孔、清洗处理,之后封接制成芯片.将链霉亲和素包被到微通道内,对膀胱癌单克隆抗体BCMab1进行生物素化修饰.链霉亲和素与生物素化抗体结合,形成链霉亲和素-生物素-抗体系统.为研究抗体对捕获率的影响,将芯片分为包被BCMab1抗体的芯片和不包被BCMab1抗体的芯片两组,将60μl、浓度为5 000个/ml的样本液以流速为10 μl/min泵入到两组芯片中.为探讨细胞浓度及流速对捕获率的影响,将细胞浓度为500、5 000和50 000个/ml的样本液,借助注射泵分别以10、15、20、25和30 μl/min的速度泵入到通道内进行筛选.为研究流速及鱼骨结构对芯片捕获靶细胞的影响,我们设计了两种不同的芯片,即含有鱼骨结构和未含有鱼骨结构的芯片,二者均包被BCMab1抗体,将60μl细胞浓度为5 000个/ml的样本液,借助注射泵,分别以流速为10、15、20、25和30 μl/min泵人到这两种芯片中.结果 制成的特异性筛选膀胱癌循环肿瘤细胞的微流控芯片,大小为4.0 cmx0.3 cm×0.5 cm.芯片有上下两层,上层为鱼骨样结构,宽50 μm,高45 μm,相邻两个鱼骨结构之间的间距为100～300 μm;下层为微通道,微通道高50 iμm.高倍显微镜下观察,包被BCMab1抗体的芯片捕获靶细胞平均(20.8±6.3)个,未含抗体的芯片捕获靶细胞平均(1.2±1.1)个,二者差异有统计学意义(P＜0.05).在流速为10μl/min时,含有抗体及鱼骨结构的芯片捕获率为(90.3 ±1.0)％,含有抗体而未含有鱼骨结构的芯片捕获率为(46.7±2.1)％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 设计的捕获膀胱癌循环肿瘤细胞微流控芯片成本低,操作简单,能高特异性捕获膀胱癌循环肿瘤细胞.
