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产CTX-M超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌传播的分子机制研究
目的 研究肺炎克雷伯菌(KPN)中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的其传播机制.方法 用K-B药敏法分析53株肺炎克雷伯菌的耐药性;用多重PCR技术扩增ESBLs、AmpC、ISEcp1B、IS903、IS26等插入序列及Ⅰ类整合子,用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找β-内酰胺酶基因盒,用长片段PCR扩增ISEcp1B下游的CTX-M型ESBLs全序列并测序.结果 17株肺炎克雷伯菌中检出CTX-M-G1,其中6株同时检出ISEcp1B、TEM、SHV、CTX-M-G1及Ⅰ类整合子,KPN 49、9检出DHA、IS903,KPN 9检出PSE;套式PCR在Ⅰ类整合子内未检出β-内酰胺酶基因,KPN 49整合子内检出二氢叶酸还原酶(dhfr)和核苷转移酶基因(aad2);KPN 49检出CTX-M ESBLs新的基因亚型,全长876 bp,与blaCTX-M-14相比在825 bp处有1个核苷酸不同,导致1个氨基酸不同,第275位由脯氨酸取代谷氨酰胺;KPN 49、9 blaCTX-M-L1ke的上游是ISEcp1B的遗传元件,提供-35及-10位点两个启动子及1个右反向重复序列(转位酶识别位点),下游是插入序列IS903提供反向重复序列组成复合转座子.结论 ISEcp1B可能对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用.
关键词： 肺炎克雷伯菌 CTX-M类β-内酰胺酶 插入序列 转座子 整合子 -
插入序列ISEcp1B在革兰阴性杆菌中的分布及基因多态性分析
目的 研究插入序列ISEcp1B基因在革兰阴性杆菌中的分布及多态性分析.方法 用K-B药敏法分析143株革兰阴性杆菌的耐药性;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增ESBLs、AmpC及ISEcp1B基因,并进行DNA测序.结果 CTX-M-GI及ISEcp1B基因的总检出率分别为41.26%及16.08%;ISEcp1B插入序列的在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌9株占20.93%、肺炎克雷伯菌6株占11.32%、铜绿假单胞菌5株占13.89%、阴沟肠杆菌2株占25.00%、弗氏柠檬酸杆菌1株占25.00%;插入序列ISEcp1B阳性株对头孢菌素的耐药率显著高于阴性株(P<0.01),在体外对亚胺培南有较好的抗菌活性;对ISEcp1B PCR产物进行测序,发现其下游均连接CTX-M型ESBLs,暂未见其他类型的β-内酰胺酶;ISEcp1B右端均连接一个反向重复序列,为转位酶提供作用位点;提供-35及-10两个启动子,对下游不同的CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用,启动子与CTX-M型ESBLs编码起始距离长短不一,并有不同程度的突变.呈多态性.结论 插入序列ISEcp1B较广泛分布于革兰阴性杆菌,增加了CTX-M型ESBLs水平播散的危险性,并对其表达起调控作用.
关键词： 革兰阴性杆菌 CTX-M类β-内酰胺酶 插入序列 转座子 传播 -
广州地区革兰阴性杆菌CTX-M和OXA型广谱β-内酰胺酶基因分型研究
目的调查广州地区临床分离的革兰阴性杆菌中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和OXA型广谱β-内酰胺酶(beta-lactamase,Bla)的主要基因型别及其流行情况.方法按照NCCLS 2001年标准筛选广州地区临床分离菌株的ESBLs表型;用聚合酶链反应(PCR)扩增法和DNA测序法进行ESBLs基因序列分析.结果PCR扩增结果显示,CTX-M1、CTX-M2、CTX-M9群和OXA的总阳性率在本地区临床分离的临床检测ESBLs阳性的革兰阴性杆菌中分别为9.96%、0、35.5%和1.6%,同时检出≥两种ESBLs基因的菌株数64株,阳性率为5.9%;序列分析进一步证实了CTX-M型ESBLs的具体型别,包括CTX-M-3、CTX-M-22、CTX-M-9、CTX-M-14、CTX-M-17、CTX-M-18、CTX-M-21、CTX-M-24、TOHO-2和TOHO-3,其比例分别为3.23%、3.7%、4.99%、3.32%、2.21%、3.69%、2.95%、4.43%、1.85%和1.48%;其中以CTX-M-9和CTX-M-24阳性率较高;在本地区只检出1种OXA型Bla-OXA-2/PSE-2(1.38%,15/1084);另外,还检出了8株无法具体归类的CTX-M-9型ESBLs,占0.74%;CTX-M型基因主要分布于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,分别占42.8%和36.3%,而OXA基因则主要分布于铜绿假单胞菌中,占80%.结论本地区CTX-M类ESBLs也较为常见,其中尤以CTX-M-9和CTX-M-24为主,暂无CTX-M2群ESBLs,可能存在1种或多种新的CTX-M型ESBLs.
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ISEcp1B介导铜绿假单胞菌CTX-M型ESBLs传播的分子机制研究
目的 了解CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)在铜绿假单胞菌传播的分子机制.方法 用Kit-by-Bauer(K-B)药敏法分析26株铜绿假单胞菌的耐药性;用多重聚合酶链式反应(PCR)扩增ESBLs、ISEcp1B插入序列及Ⅰ类整合子;用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找β-内酰胺酶基因盒.结果 26株多重耐药铜绿假单胞菌对下列抗生素的耐药率为:(1)头孢噻肟(69.23%)、哌拉西林(65.38%)、替卡西彬克拉维酸(65.38%)、头孢他啶(57.69%)、头孢吡肟(46.15%)、环丙沙星(50.00%)、氨曲南(46.15%)、阿米卡星(34.62%)、亚胺培南(30.77%)、头孢哌酮/舒巴坦(23.08%);(2)11株铜绿假单胞菌中检出CTX-M-G1,其中4株同时检出TEM、SHV、CTX.M.G1、ISEcp1B及Ⅰ类整合子,Ⅰ类整合子内未扩增出β-内酰胺酶;(3)ISEcp1B下游均连接CTX-M型ESBLa,ISEep1B右端有一个反向重复序列,为转位酶提供作用位点;-35及-10位点各有一个启动子,对下游不同的CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用.结论 ISEcp1B可能对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用.
关键词： 铜绿假单胞菌 CTX-M类β-内酰胺酶 插入序列 转座子 整合子
