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基于非对称发夹探针的杂交链反应技术应用于病原菌检测的实验研究
目的 应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术,检测肺炎克雷伯菌不对称PCR产物,建立一种新的病原菌快速检测方法.方法 采用Array Designer 4.0软件,针对肺炎克雷伯菌的16S rDNA可变区域设计非对称发夹式DNA探针,优化探针浓度,以不对称PCR扩增肺炎克雷伯菌16rDNA可变区所制备的单链DNA为靶序列,采用HCR进行检测和分析.结果 HCR体系中发夹探针佳浓度为1μmol/L;当靶序列初始浓度≥0.05μmol/L时,通过琼脂糖凝胶电泳可观察到明显的HCR聚合物；不对称PCR法制备的单链DNA可以启动杂交反应.结论 应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术检测病原菌具有反应体系简单,无需酶促反应等优点,可对血流感染病原菌基因组进行简便、快速、特异的检测.
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杂交链反应在生物传感检测技术中的应用
开发功能强大、简单可行且成本低廉的DNA扩增技术对生物分析和生物医学研究意义重大.目前,已开发出了许多信号放大策略,例如聚合酶链反应( PCR)、滚环扩增(RCA)和 DNA 链置换扩增( SDA ).其中杂交链反应(HCR)是利用一种立足点介导的链置换反应,其具有不需要酶介导、可在等温条件下进行、实验方案简单、扩增效率高等多种优点,引起了研究者的极大兴趣.在典型的HCR反应中,靶物质引发两个DNA发夹的交叉结合,产生类似于交替共聚物的DNA双螺旋结构.作为一个高效的扩增策略, HCR已被用于检测各种分析物,包括核酸、蛋白质、小分子和细胞.该综述对HCR在生物传感检测中的应用进行了总结,同时分析了HCR面临的挑战与机遇.
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杂交链反应在超灵敏检测方面的应用进展
DNA在生命活动中具有重要意义,针对DNA检测技术日益增多,近些年一种无酶等温高效的超灵敏扩增技术,杂交链反应(HCR)逐渐引起广泛的关注.HCR,仅在特定的核苷酸引发物(NI)和两个特殊设计的发夹DNA(H1,H2)同时存在的情况下进行自组装,实现了原位扩增反应.由于NI,H1,H2的可编辑性及可修饰性,使得HCR适用于分子生物学的各个领域,具有广泛的应用前景.该文通过HCR在核酸检测、蛋白检测、细胞检测及生物成像等方面的应用进展来探究其优点和不足.
