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解脲脲支原体的N端保守部分MB优化基因在大肠埃希菌中的高效表达
目的 制备N-端保守部分多条带抗原(MB),克隆并在大肠埃希菌中表达其基因,并鉴定重组MB的抗原性.方法分析14个不同血清型解脲脲支原体(Uu)的基因排列,根据大肠埃希菌偏爱密码子,优化、设计合成DNA序列编码的氨基酸保守序列,合成的基因克隆到表达质粒,重组蛋白诱导和亲和层析纯化.结果 通过对Uu 14个血清型MB抗原氮端的氨基酸序列的分析、比对,根据大肠埃希菌的偏好密码子优化、设计并合成碱基序列,目的基因片段与pET-41a构建重组质粒并转化大肠埃希菌后,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析,得到了分子量约为45 kd的重组蛋白,纯化后的MB抗原蛋白能够较特异地与特异性抗体结合,敏感性为85.7％,特异性为87.8％.结论 Uu N-端保守部分的MB蛋白已成功表达、纯化并被证明具有良好的免疫原性.
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解脲脲原体多条带抗原在大肠埃希菌中的表达和重组抗原的抗原性分析
目的 利用大肠埃希菌体外表达系统克隆、表达解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,Uu)多条带抗原(MB抗原)并对其抗原性进行分析.方法 将MB抗原基因的5'端保守性序列克隆到Gateway系统表达载体pDEST17上,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达.通过载体携带的6×His标签,纯化体外表达重组蛋白.并将重组蛋白与临床感染Uu的患者血清反应检测重组蛋白的抗原性.结果 DNA序列分析证明MB抗原基因5'端414 bp的保守序列成功克隆至表达载体上,SDS-PAGE显示在大肠埃希菌中表达的重组蛋白与MB抗原大小符合.免疫印迹结果表明,体外重组表达的MB抗原能够与Uu感染的患者血清反应,提示其抗原性良好.结论 解脲脲原体MB抗原的体外表达及其良好的抗原性,有助于建立Uu感染的血清学检测方法.
