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细菌性感染PCR诊断方法的建立及其应用研究
目的 通过通用引物PCR,为建立一种实用、快速可靠细菌感染PCR检测方法奠定基础.方法 收集100例疑似血流感染患者的血液进行细菌培养,同时检测细菌16S rRNA基因,测定和分析所得DNA序列,对培养结果与PCR结果进行比较;采用倍比稀释法进行PCR灵敏度检测.结果 100份血液标本中细菌培养8份阳性,阳性率为8.0%;PCR法19份阳性,阳性率为19.0%,细菌培养与PCR检测结果比较,差异有统计学意义(χ2=9.09,P＜0.05);测序结果显示DNA序列与GenBank公布的基因序列同源性很高,PCR可检测范围至1.5×102 CFU/ml.结论只要严格控制污染,通过16S rRNA基因PCR技术对疑似血流感染的临床诊断具有重要意义.
关键词： 细菌性感染 聚合酶链反应 16S核糖体核糖核酸 -
16SrRNA基因快速诊断败血症病原菌研究
目的 通过合成所有细菌共有的16SrRNA基因高度保守区引物,进行PCR扩增,探讨败血症的快速诊断方法.方法 用PCR技术扩增实验室保留株10株的16SrRNA基因,以人类基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌为对照,检测该方法的特异性;采用倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测.结果 对所测细菌株均获得920bp扩增产物,而与人基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌无交叉反应;PCR低能检测1.5×106/L大肠杆菌DNA.结论 PCR检测方法是一种极有应用价值的用于败血症早期诊断方法.
关键词： 16S核糖体核糖核酸 聚合酶链反应 败血症 -
PCR在诊断慢性非细菌性前列腺炎中的应用价值
目的 建立基于16S rRNA基因的PCR细菌学检测方法,用于慢性非细菌性前列腺炎患者前列腺液的细菌学检查.方法 应用PCR方法检测105例慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液中细菌16S rRNA基因.用PCR技术扩增10株实验室保留株的16S rRNA基因,以HBV-DNA、白假丝酵母菌和人类基因组DNA为对照,检测该方法的特异性;采用10倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测.结果 细菌16S rRNA基因的检出率在前列腺液中为35.2%.对所测细菌株均获得371 bp扩增产物,而与HBV-DNA、白色假丝酵母菌和人类基因组DNA无交叉反应;PCR低能检测15 CFU/mL大肠杆菌.结论 PCR具有快速、特异性和敏感性高的特点,可用于慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液中细菌16S rRNA基因的检出.
关键词： 16S核糖体核糖核酸 聚合酶链反应 慢性非细菌性前列腺炎 -
16SrRNA基因在诊断慢性非细菌性前列腺炎中的应用
目的 探索快速可靠的检测慢性非细菌性前列腺炎细菌感染的新方法.方法 应用PCR方法检测70例慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和尿道拭子中细菌16SrRNA基因.用PCR技术扩增实验室保留株10株的16SrRNA基因,以人类基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌为对照,检测该方法的特异性;采用倍比稀释法进行该方法的灵敏度检测.结果 细菌16SrRNA基因的检出率在前列腺液中和尿道拭子中分别为54.3%和7.1%,差异有显著意义(P＜0.01).对所测细菌株均获得920 bp扩增产物,而与人基因组DNA、HBV-DNA和白色念珠菌无交叉反应;PCR低能检测1.5*106/L大肠杆菌DNA.结论 慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液中有细菌16SrRNA基因的检出,其病因可能与细菌感染有关.PCR具有快速,特异性和敏感性高的特点.
关键词： 16S核糖体核糖核酸 聚合酶链反应 前列腺炎 -
慢性骨盆疼痛综合征前列腺液16S rRNA基因检测及临床意义
目的:通过前列腺液16S rRNA基因的检测,探讨慢性骨盆疼痛综合征(CPPS)的细菌感染性病因及其对抗生素疗效的预测价值.方法:用通用引物PCR法检测59例CPPS病人前列腺液(EPS)和初段尿(VB1)细菌16SrRNA基因.若只在EPS检测到条带,或EPS信号比VB1强10倍以上,则细菌信号判断为阳性.所有病人口服左氧氟沙星及阿奇霉素治疗4周.与治疗前相比,治疗后症状严重性积分指数(SSI)、症状频度问卷积分(SFQ)、前列腺炎症状积分指数(NIH-CPSI)中疼痛问题的总积分(quasi-CPSI)减少50%以上,或病人主观总体评价改善50%以上作为治疗有效的标准.结果:59例CPPS病人中细菌信号阳性46例、阴性13例.细菌信号阳性与阴性两组治疗有效率分别为65%～74%、0,疗效差异有极显著性(P＜0.01).结论:部分CPPS与细菌感染有关,前列腺16S rRNA基因检测的结果对选择抗生素治疗有指导意义.
关键词： 慢性前列腺炎 慢性骨盆疼痛综合征 16S核糖体核糖核酸 聚合酶链式反应 -
长远航作业人员口腔细菌16S rRNA测序
目的 探讨海上长远航作业人员口腔颊黏膜共生菌的变化以及与宿主健康的相关性.方法 采集海上远航作业人员作业前后口腔颊黏膜微生物样本,提取基因组DNA后扩增16S rRNA基因片段,并应用Sanger测序方法检测微生物种类.结果 随机选取474个克隆测序,共鉴定到62种细菌,84.60％为硬壁菌门,65.19％为链球菌属,其中缓症链球菌、口腔链球菌含量高.比较长远航前后期细菌,得到19种长远航前后共有菌、10种长远航前特有菌与33种长远航后特有菌.长远航后口腔颊黏膜出现肺炎链球菌和具核梭杆菌等致病菌和条件致病菌,优势菌链球菌属中口腔链球菌的比例下降,缓症链球菌的比例升高.结论 海上远航特殊环境下作业人员口腔颊黏膜共生菌群改变,可能与宿主口腔及全身性疾病相关.
关键词： 口腔颊黏膜 长远航 16S核糖体核糖核酸 致病菌 条件致病菌 -
慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和前列腺组织中的细菌16SrRNA基因检测
目的:探讨细菌在慢性非细菌性前列腺炎病因中的作用,评估细菌16S核糖体核糖核酸(16SrRNA)基因在前列腺液标本和前列腺组织标本中检出的差异.方法:应用PCR方法检测38例慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和前列腺组织中细菌16SrRNA基因,同时对照检测尿道拭子和直肠拭子以及穿刺枪头拭子的细菌16SrRNA基因.结果:细菌16SrRNA基因的检出率在前列腺液中和前列腺组织中分别为 78.9%和81.5%(P＞ 0.05).细菌基因信号在前列腺液标本中和尿道拭子中各有30例( 78.9%)和4例( 10.5%)呈阳性(P＜ 0.01);在前列腺组织中和直肠拭子中各有31例( 81.5%)和6例( 15.8%)呈阳性(P＜ 0.01),无一例穿刺枪头拭子阳性.结论:慢性非细菌性前列腺炎患者的前列腺液和前列腺组织中均有细菌16SrRNA基因的检出,其病因可能与细菌感染有关. 细菌16SrRNA基因的检出在前列腺液标本和前列腺组织标本中差异无统计学意义.
关键词： 前列腺炎 16S核糖体核糖核酸 聚合酶链反应 -
16S rDNA测序在儿童血流感染细菌性病原菌分布中的应用
目的：探讨PCR方法在分析血流感染病原菌分布中的作用，为儿童细菌性血流感染的流行病学调查提供新的思路。方法从儿科重症监护病房（PICU）收集100份疑似血流感染患儿的外周静脉血进行血培养，同时扩增并测序细菌16S rDNA，比较培养结果与PCR结果。结果100份血液标本中11份细菌培养阳性，阳性率为11%；PCR法23份阳性，阳性率为23%，二者比较差异具有统计学意义(χ2=10.08，P<0.05)；在23例PCR阳性标本中，革兰氏阳性球菌占65.2%，其中表皮葡萄球菌多(6例，26.1%)，革兰氏阴性菌占34.8%，以大肠埃希菌为主(4例，17.4%)。结论16S rDNA-PCR结合测序的方法可以很好地鉴定血流感染病原菌，与血培养相比能更客观地反映病原菌分布，可作为一种新的流行病学方法在临床应用；儿科重症监护病房血流感染病原菌以革兰氏阳性球菌为主，尤以表皮葡萄球菌常见。
关键词： 血流感染 16S核糖体核糖核酸 细菌 测序 儿童 -
16SrDNA测序在儿童细菌性脑膜炎病原菌鉴定中的应用
目的 探讨16S rDNA-PCR结合测序快速检测儿童细菌性脑膜炎病原菌的价值.方法 收集2013年1月至2016年12月西安市儿童医院4016例儿童脑脊液标本进行16S rDNA-PCR;测序阳性扩增产物并BLAST比对,与培养结果比较.结果 4016例脑脊液标本16S rDNA-PCR阳性161例(阳性率4.0％),培养阳性104株(阳性率2.6％),二者比较差异具有统计学意义(χ2=57,P<0.05);从测序结果看,革兰阳性菌101株(62.7％),革兰阴性菌60株(37.3％);常见的5种病原菌依次为表皮葡萄球菌41株(25.5％),肺炎链球菌22株(13.7％),大肠埃希菌21株(13.0％),流感嗜血杆菌15株(9.3％)和金黄色葡萄球菌13株(8.1％).结论 16S rDNA-PCR结合测序能够很好地鉴定细菌性脑膜炎病原菌,比培养法检测时间更短、菌谱分布更宽,可作为一种新的检测方法和流行病学方法在临床应用;儿童细菌性脑膜炎病原菌以革兰阳性球菌为主.
关键词： 细菌性脑膜炎 16S核糖体核糖核酸 测序 新生儿 儿童 -
富西亚分枝杆菌从血液与静脉插管中的分离与鉴定
目的 对从同一患者血液和静脉插管中分离的两株抗酸阳性细菌B0793、V1948进行菌种鉴定.方法 广谱PCR扩增细菌的16S核糖体核糖核酸(16S rRNA)基因与核糖核酸(RNA)聚合酶β亚单位(rpoB)基因,测序其核苷酸序列并与相关菌种进行同源性比对及系统发育分析,以传统的表型实验对基因鉴定的结果 进行验证,并参考CLSI M24-A的方法 和解释标准进行分离株抗菌药物的药物敏感性试验.结果 该2株细菌均为血平板上生长缓慢的革兰染色着色较淡的抗酸阳性杆菌,但2株细菌的菌落形态差别较大,B793在血平板培养4 d形成直径1 cm、米黄色、圆形、突起、不溶血、易乳化的光滑型菌落,V948则为直径约2 cm、米黄色、豆腐渣样、边缘不规则的粗糙型菌落.16S rRNA基因和rpoB基因序列与富西亚分枝杆菌(mycobacterium phocaicum)的同源性均在99%以上,其半定量触酶、68 ℃触酶试验、5% NaCl耐受试验与脲酶试验阴性,亦符合富亚分枝杆菌的特征.结论 该2株抗酸阳性细菌在分类学上属于富西亚分枝杆菌,其光滑型/粗糙型菌落变异为国际上首次发现.
关键词： 分枝杆菌 16S核糖体核糖核酸 聚合酶β亚单位 序列分析
