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髓样分化因子88抑制剂ST2825对RAW264.7细胞生物学活性的影响
目的 探讨Toll样受体信号转导分子髓样分化因子88(MyD88)抑制剂ST2825对巨噬细胞系RAW264.7细胞生物学活性的影响,为新型免疫抑制剂的研发提供新的思路.方法 培养RAW264.7细胞并分为4组:空白对照组细胞不给予任何处理和刺激;脂多糖对照组细胞给予脂多糖(500 ng/mL)刺激;ST2825低浓度组和高浓度组细胞分别给予浓度为10 μmol/L和20 μmol/L 的ST2825预处理1 h后再给予脂多糖刺激.36 h后收集细胞,流式细胞术检测细胞表面共刺激分子CD80和CD86的表达;提取细胞RNA,实时荧光定量PCR检测IL-1、IL-6、TNF-α mRNA水平.异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-Dextran)法测定细胞吞噬功能.结果 脂多糖对照组RAW264.7细胞共刺激分子CD80和CD86表达率分别为(54.2±1.6)%和(56.8±2.9)%,与空白对照组相比均明显升高(均P<0.05);ST2825低浓度组和高浓度组CD80表达率分别为(37.4±1.7)%和(26.4±1.2)%,CD86表达率分别为(43.4±2.0)%和(31.5±1.1)%,与脂多糖对照组相比均降低(均P<0.05).经脂多糖刺激后,脂多糖对照组RAW264.7细胞IL-1、IL-6和TNF-α mRNA表达水平升高,ST2825可降低上述促炎性细胞因子的mRNA表达水平.ST2825低浓度组和高浓度组细胞吞噬FITC-Dextran的能力与正常RAW264.7细胞无差异.结论 MyD88抑制剂ST2825可抑制脂多糖对天然免疫细胞的免疫活化效应,而不影响细胞的吞噬功能,为ST2825作为免疫抑制剂用于临床奠定了实验基础.
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髓样分化因子88抑制剂ST2825影响重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞炎性分泌功能
目的 通过观察髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,myd88)抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染的THP-1细胞的炎性分泌功能的抑制,来探讨髓样分化因子88在分枝杆菌促巨噬细胞分泌炎性因子功能中的作用.方法 使用Myd88的抑制剂ST2825干预重组耻垢杆菌感染的THP-1细胞为实验模型,分为三组:实验组(THP-1细胞+重组耻垢分枝杆菌+ST2825)、对照组(THP-1细胞+重组耻垢分枝杆菌)、空白组(THP-1细胞),用ELISA法检测三组TNF-α、IL-12和IL-6的分泌情况.结果 实验组的TNF-α、IL-12和IL-6的量较对照组显著减少,其两者P值＜0.05,差异具有统计学意义.结论 髓样分化因子88抑制剂ST2825可抑制THP-1细胞的炎性分泌功能.
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髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP-1细胞自噬的影响
目的：探讨髓样分化因子88抑制剂ST2825对重组耻垢分枝杆菌感染THP?1细胞自噬的影响。方法使用髓样分化因子88抑制剂ST2825作用于重组耻垢分枝杆菌感染的THP?1细胞，确定ST2825干预的实验组、无ST2825作用的对照组以及空白组。运用荧光显微镜观察自噬小体，RT?PCR检测Beclin?1基因和Bcl?2基因的mRNA的表达。结果与对照组比较，实验组的自噬荧光小点数目明显减少，差异具有统计学意义（P<0.05）；RT?PCR检测结果显示Beclin?1和Bcl?2 mRNA表达较对照组下调。结论髓样分化因子88抑制剂ST2858可能通过干扰Beclin?1和Bcl?2的分离，抑制THP?1细胞自噬。
