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人乳头状瘤病毒HPVE6E7文献资料
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腺病毒伴随病毒表达载体表达人乳头状瘤病毒16型E6/E7基因的构建及应用
目的为了了解人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)16型的E6/E7基因在细胞恶性转化中所起的作用,利用腺病毒伴随病毒载体(AAV Helper-Free System)构建和表达人乳头状瘤病毒16型E6/E7基因.方法在pLXSN16 E6E7质粒中经PCR扩增回收HPV 16 E6E7基因片段,连接于T载体上进行测序,将正确的HPV 16 E6E7插入pAAV-IRES-hrGFP质粒,协同pAAV-RC质粒和pHelper质粒共转染HEK 293细胞,包装表达HPV 16 E6E7基因的重组腺病毒伴随病毒,收获病毒,并检测病毒的感染效率.结果在包装细胞系HEK 293细胞中能形成较高感染效率的腺病毒伴随病毒,激光共聚焦检测可发现HEK 293细胞内有绿色荧光蛋白表达,HEK 293细胞经PCR可扩增出特异性的HPV 16 E6E7基因片段,经流式细胞仪检测重组病毒的感染效率为71.3%.结论携带人乳头状瘤病毒16型E6E7基因的腺病毒伴随病毒可感染细胞,并在细胞内表达,可望用于宫颈癌病因学的研究.
关键词： 腺病毒伴随病毒 人乳头状瘤病毒HPVE6E7 转染 表达
