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叶绿酸f光动力体外杀伤膀胱癌疗效及机制研究
目的 光动力治疗是近年来新兴起的一种肿瘤治疗方式,光敏剂是光动力治疗的关键.本研究旨在明确叶绿酸f光动力学体外杀伤膀胱癌细胞的效果及其可能机制. 方法 体外培养膀胱癌5637和T24细胞,CCK-8法检测叶绿酸f结合650 nm激光对膀胱癌细胞的生长抑制作用.叶绿酸f和特异性线粒体荧光探针同细胞共孵育4 h后,激光共聚焦显微镜观察其亚细胞分布;DAPI染色PDT后12 h的癌细胞,荧光显微镜下观察细胞形态学改变;采用流式细胞仪分析凋亡率. 结果 4 J/cm2激光照射后,1、2和4 μg/mL的叶绿酸f对5637细胞生长抑制率分别为 33.92%、57.38%和 84.88%,在 2 J/cm2激光照射后分别为25.4%、51.21%和 70.09%;对T24 细胞,2.5、5和10 μg/mL浓度药物4 J/cm2生长抑制率分别为 34.03%、60.11%和86.51%,2 J/cm2 分别为31.79%、53.83%和 72.89%.激光共聚焦显微镜观察到叶绿酸f的红色荧光与线粒体探针的绿色荧光分布范围一致,都在细胞质中,细胞核中无分布.DAPI染色后荧光显微镜下可见处理组细胞均出现胞核边缘不规则,核固缩,核溶解、碎裂,核小体碎片增加等现象,空白对照组细胞则未见到此类凋亡表现.流式细胞术检测结果显示,4 μg/mL浓度结合4 J/cm2激光处理组5637细胞凋亡率为(50.61±1.66)%,对照组凋亡率为(4.05±0.12)%,差异有统计学意义,U=6.21,P=0.042;10 μg/mL浓度结合4 J/cm2组T24细胞凋亡率为(54.3±1.32)%,对照组凋亡率为(11.31±0.71)%.差异有显著性意义,U=7.35, P=0.030.结论 叶绿酸f结合650 nm激光,能够高效杀灭膀胱癌细胞,该杀灭效应随药物剂量及激光能量的增加明显升高.杀灭机制可能是药物进入癌细胞后定位于线粒体,诱导肿瘤细胞凋亡.
