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人腺苷酸活化蛋白激酶5基因 RNA 干扰慢病毒载体的构建及其对人胃癌 SGC7901细胞生物学行为的影响
目的：探讨人腺苷酸活化蛋白激酶5（ARK5）基因 RNA 干扰（RNAi）慢病毒载体的构建及其对人胃癌 SGC7901细胞生物学行为的影响。方法以人 ARK5 mRNA 编码序列为干扰靶点，设计3条沉默 ARK5的特异性短发卡 RNA（shRNA），构建重组慢病毒表达载体，转染人胃癌 SGC7901细胞。采用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 检测 ARK5基因的沉默效果，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell 法检测细胞侵袭能力，流式细胞仪检测葡萄糖饥饿和肿瘤坏死因子α（TNF－α）诱导处理对细胞凋亡的影响。结果测序结果证明， RNAi 重组慢病毒载体 ARK5－shRNA－3构建成功。实时荧光定量 PCR 检测显示，正常对照组、阴性对照组和 ARK5－shRNA－3转染组的 ARK5基因表达水平分别为1．002±0．082、1．001±0．050和0．140±0．003。 ARK5－shRNA－3转染组与正常对照组、阴性对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．01）。细胞划痕实验显示，ARK5－shRNA－3转染组的细胞迁移率为（38．5±4．3）％，而正常对照组和阴性对照组的细胞迁移率分别为（72．4±6．4）％和（75．1±7．1）％，差异有统计学意义（P＜0．01）。 Transwell 检测结果显示，正常对照组、阴性对照组和 ARK5－shRNA－3转染组的穿膜细胞数分别为（257．4±12．3）个、（245．7±11．6）个、（112．5±7．8）个，ARK5－shRNA－3转染组与正常对照组、阴性对照组差异有统计学意义（P＜0．01）。在葡萄糖饥饿和 TNF－α处理24 h 后，正常对照组、阴性对照组和 ARK5－shRNA－3转染组的细胞凋亡率分别为（11．7±3．2）％、（12．3±2．6）％和（30．8±4．3）％，ARK5－shRNA－3转染组与正常对照组、阴性对照组差异有统计学意义（P＜0．01）。结论成功构建了能高效沉默 ARK5基因的重组慢病毒表达载体，并且明显地抑制了胃癌细胞增殖、迁移和侵袭，促进了胃癌细胞在饥饿胁迫及 TNF－α诱导情况下的凋亡。
关键词： 胃肿瘤 腺苷酸活化蛋白激酶 5 RNA 干扰 慢病毒感染 葡萄糖饥饿
