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Caveolin-1RNA干扰真核表达载体的构建及其对人类胃癌细胞生物学行为的影响
目的 构建针对Caveolin-1(CAV1)基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体psilence4.1-CMV-neo-CAV1并转染胃癌细胞株SGC7901,探讨siRNA抑制CAV1表达对人类胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响.方法 根据GeneBank提供的CAV1基因核苷酸序列,设计并化学合成3对双链siRNA.瞬时转染胃癌细胞株SGC7901,通过半定量RT-PCR检测各转染细胞CAV1表达,筛选一个有效的siRNA序列.设计并合成能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列.构建CAV1基因的RNA干扰真核表达载体,稳定转染胃癌细胞株SGC7901,RT-PCR法鉴定SGC7901细胞中CAV1基因的表达,通过细胞生长曲线、克隆形成实验及流式细胞术检测抑制CAV1的表达对胃癌细胞生长增殖的影响.结果 成功构建CAV1 RNA干扰真核表达载体psilence4.1-CMV-neo-CAV1,稳定转染靶细胞后显著降低CAV1的表达,与转染空载体组比较,增生指数及集落形成率增高,差异有统计学意义(分别为t=7.98,P<0.05;t=13.19,P<0.01),生长速度亦增快.结论 RNA干扰胃癌细胞CAV1的表达促进了胃癌细胞生长增殖能力.
