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PEA-15真核表达载体的构建及表达
目的 构建PEA-15真核表达载体pcDNA3.1-PEA-15,并在人类食管癌细胞(EC-109)中表达.探讨PEA-15对EC-109细胞的影响.方法 采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测EC-109细胞中的PEA-15基因表达.构建重组真核表达载体pcDNA3.1-PEA-15.酶切及测序鉴定重组质粒正确后,脂质体介导转染至EC-109细胞中.采用RT-PCR、Western blot法检测基因及蛋白表达.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制率.结果 RT-PCR显示PEA-15在EC-109细胞中表达.PCR扩增片段与预期片段大小相符,测序结果表明真核表达载体pcDNA3.1-PEA-15构建成功.转染后的细胞中PEA-15表达均增加(t值分别为4.078、5.269,均P＜0.05).转染质粒72h后,细胞的生长抑制率较转染空质粒组降低[(7.12±0.86)％、(12.55±1.78)％,t=6.163,P＜0.05].结论 成功构建重组真核表达载体pcDN A3.1-PEA-15,并在EC-109细胞中进行了表达;转染后对食管癌细胞生长有促进作用,其表达可能促进食管癌的发生.
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不同间歇时间磁刺激对星形胶质细胞迁移能力的影响及机制分析
目的 探讨不同间歇时间磁刺激对星形胶质细胞迁移能力的影响及相关机制.方法 将传代星形胶质细胞分为对照组、1 s间歇组、5 s间歇组和10s间歇组,分别给予相应间歇时间磁刺激,观察不同间歇时间磁刺激对星形胶质细胞迁移能力的影响;星形胶质细胞在磁刺激作用下,采用PEA-15磷酸化阻滞剂Bis I、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)阻滞剂U0126处理细胞,采用Transwell实验检测星形胶质细胞迁移能力,采用Western blot技术检测pPEA-15和pERK1/2表达.结果 1 s间歇时间磁刺激可明显增强星形胶质细胞迁移能力,促进PEA-15及ERK1/2磷酸化,并提高基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达;加入Bis I可降低ERK1/2磷酸化水平及MMP-9表达,减弱磁刺激对星形胶质细胞的促迁移作用;经U0126试剂处理后,发现磁刺激对星形胶质细胞的促迁移作用显著下降.结论 1 s间歇时间磁刺激能促进星形胶质细胞PEA-15磷酸化,提高ERK1/2磷酸化水平,进而增强下游蛋白MMP-9表达,从而促进星形胶质细胞迁移.
