首页 > 文献资料
-
腺病毒介导的人肝细胞生长因子对大鼠脑膜间皮细胞的转染效率及增殖和迁移效应
目的 观察腺病毒介导的人肝细胞生长因子(Ad-HGF)对大鼠脑膜间皮细胞(RMMC)的转染效率及增殖和迁移效应.方法 原代培养RMMC并鉴定;携带增强型GFP基因的腺病毒载体(Ad5-EGFP)转染RMMC,通过荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染细胞的佳转染强度(MOI);酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测不同转染强度(25、50、100及200 PFU/细胞)Ad-HGF转染RMMC后上清液中肝细胞生长因子(HGF)的表达;ELISA法检测不同时间点(0、2、4、6、8、10、12及14 d)上清液中HGF的表达;MTT法检测不同体积百分数(0%、25%、50%、75%、100%)表达上清对细胞的增殖效应;Transwells法和划痕实验检测表达上清对细胞的迁移效应.应用曲线拟合完成直线回归方程,两样本均数比较采用独立样本t检验,多组间比较选用单因素方差分析.结果 体外成功培养并鉴定RMMC;Ad5-EGFP转染细胞MOI为200 PFU/细胞,转染效率高达96.21%;上清液中HGF的表达随MOI增加而增加,且呈一定浓度依赖性,差异有显著性(F=407.851,P<0.05),MOI=200 PFU/细胞时,HGF表达量为(97.275±3.035)ng/ml;HGF表达量呈一定时间依赖性,差异有统计学意义(F=384.063,P<0.05),转染后48 h达高峰,峰值为(104.275±2.356)ng/ml,随后下降,10 d下降明显,随后保持相对稳定水平;表达上清对RMMC有明显促增殖效应,且呈一定浓度依赖性,差异有统计学意义(F=285.946,P<0.05);表达上清对RMMC有促迁移效应,差异有统计学意义(t=34.135,P<0.05).结论 Ad-HGF可高效转染大鼠脑膜间皮细胞并在细胞中表达,表达上清对细胞有明显促增殖和促迁移效应.
