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小鼠GL261脑胶质瘤原位模型的介绍和GL261细胞免疫原性的初步探讨
胶质母细胞瘤是成人常见的原发性脑恶性肿瘤,近年来尽管手术、放疗、化疗都取得了一定的进展,但患者预后仍很差.免疫治疗研究是胶质母细胞瘤治疗研究的热点之一,需要有能够复制人胶质母细胞瘤特征、重复性好的胶质瘤动物模型[1],并且需要了解成瘤细胞的免疫原性.本文介绍一种目前应用较广泛的小鼠GL261脑胶质瘤原位模型,并初步探讨GL261细胞的免疫原性.
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槲皮素对人胶质母细胞瘤T98G凋亡及HSP27蛋白表达的干预作用
目的：探讨天然药物槲皮素对人胶质母细胞瘤的生物效应及机制。方法采用槲皮素治疗人胶质母细胞瘤细胞系T98G，MTT法检测治疗后T98G细胞的增殖抑制情况；流式细胞术检测槲皮素治疗后T98G细胞的凋亡情况，并用Western blot检测细胞活化caspase-3（cleaved caspase-3）的表达和热休克蛋白27（HSP27）的表达；将T98G细胞的HSP27基因用特异性HSP27 siRNA沉默后再用槲皮素治疗，检测槲皮素对T98G细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应。结果对照组及5μM、25μM、50μM、100μM、200μM槲皮素组对T98G细胞的48h 增殖抑制率分别为0、（0.05±0.02）%、（21.8±3.4）%、（42.2±5.7）%、（67.6±6.8）%、（76.9±7.0）%，各浓度槲皮素组与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。对照组及25μM、50μM、100μM槲皮素组对T98G细胞的凋亡诱导率分别为（0.8±0.3）%、（4.9±0.6）%、（8.1±0.9）%、（21.5±1.7）%，各浓度槲皮素组与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。对照组及25μM、50μM、100μM槲皮素组T98G细胞caspase-3活性分别为（0.01±0.01）、（0.05±0.03）、（0.12±0.03）、（0.22±0.05），50μM、100μM槲皮素组与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；HSP27活性分别为（0.84±0.12）、（0.75±0.11）、（0.52±0.08）、（0.37±0.06），50μM、100μM槲皮素组与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论槲皮素有良好的抗神经胶质母细胞瘤的生物活性，其抗肿瘤机制可能和下调HSP27蛋白有关。
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RNA干扰下调CENP－F对 U251细胞增殖的影响
目的：探索抑制着丝粒蛋白F（CENP－F）表达对人胶质母细胞瘤细胞系U251增殖的影响。方法：培养U251细胞，转染抑制片段，检测空白对照组（未做任何处理，Blank组），阴性对照组（转入空白质粒组，NC组）及转入抑制片段组（si－CENPF组，根据转入的干扰片段分si－CENPF＃1组、si－CENPF＃2组、si－CENPF＃3组）各组CENP－F mRNA的表达。挑选抑制明显的片段进行Western－botting进一步检测CENP－F蛋白水平的表达。行MTT检测转染细胞组与空白对照组及阴性对照组的细胞增殖力。结果：干扰片段能抑制U251细胞系CENP－F mRNA水平及蛋白水平的表达，同时能抑制U251细胞的增殖。结论：抑制CEAFP的表达能降低人胶质母细胞瘤细胞系U251的增殖。
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环靶明在体内及体外可抑制人胶质母细胞瘤A172细胞的生长
目的 研究Hedgehog信号通路特异性阻断剂环靶明(cyclopamine)在体内及体外对人胶质母细胞瘤A172细胞生长的影响.方法 用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测环靶明对A172细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测环靶明处理前后Smoothened蛋白(Smoothened,SMO)、GLI家族锌指蛋白1(GLI-Kruppel family member 1,GLI1)在A172中的mRNA表达及变化,免疫印迹法(Western Blot)检测环靶明处理前后SMO、GLI1在A172中的蛋白表达及变化;环靶明对A172裸鼠皮下移植瘤生长的影响.结果 环靶明抑制A172细胞的增殖,其作用呈剂量和时间依赖性;经不同浓度的环靶明作用48 h后A172细胞的凋亡率逐渐升高,明显高于对照组的凋亡率(P＜0.01),并存剂量依赖性.SMO、GLI1的mRNA和蛋白均在A172中表达,环靶明下调A172的SMO、GLI1表达.环靶明可抑制A172裸鼠皮下移植瘤的生长.结论 在体内及体外阻断Hedgehog信号通路可抑制人胶质母细胞瘤细胞A172的生长.
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吐温-80合并温热对人多型性胶质母细胞瘤细胞系BT-325的诱导分化
目的研究吐温-80合并温热对BT-325人多型性胶质母细胞瘤细胞系BT-325细胞的分化诱导效应.方法应用免疫细胞化学等方法,观察BT-325细胞经吐温-80合并41℃温热作用后(24小时)胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因的表达;并通过克隆形成率及测定细胞生长曲线等方法观察细胞恶性增殖能力.结果 (1)BT-325细胞经吐温-80合并温热作用后,出现明显的分化特征:胞体显著增大,贴壁明显,细胞突起增多,与周围细胞接触,且有接触抑制现象;GFAP的含量明显增加;(2)克隆形成率显示合并作用后克隆形成数减少,与对照组比较有显著差异(P＜0.01).结论吐温-80合并41℃温热作用可显著抑制BT-325细胞恶性增殖,并有促进GFAP表达的效应,显示吐温-80合并温热对BT-325细胞的分化有诱导效应.
