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抗NI-35重组单链抗体(anti-NI-35-scFv)文献资料
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抗NI-35重组单链抗体基因cDNA的合成与克隆
目的抗NI-35抗体(anti-NI-35 antibody)作为神经再生抑制因子(NI-35)的拮抗剂对神经再生促进作用的研究是近年的热点,研究表明,抗NI-35抗体能促进体内外受损伤神经元的存活和突起生长.我们重新设计并人工合成抗NI-35重组单链抗体(anti-NI-35-scfv)的cDNA克隆,构建其表达载体,在原核系统中实现初步表达.方法参照genebank中发表的抗NI-35抗体的轻链重链序列,重新设计适于在大肠杆菌中表达的目的基因片段,将该基因双链分成35个小片段合成,经退火、复性连接成目的片段后,克隆到经过BamHI和HindⅢ双酶切的克隆载体pUC18中,并转化大肠杆菌DH5a,抽提重组子pUC18/744进行克隆PCR、酶切鉴定及测序分析.结果测序结果证明获得的基因序列与实验设计仅差一个碱基.结论正确合成了抗NI-35重组单链抗体(anti-NI-35-single-chain antibody),为抗NI-35抗体应用于治疗弥漫性轴索损伤提供了实验基础.
