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猿猴肉瘤病毒(SV40)文献资料
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大鼠血管纹边缘细胞永生细胞系的建立
目的 建立大鼠血管纹边缘细胞(Marginal Cells,MC)的永生细胞系,为进一步研究MC的功能打下基础.方法 取3～5日龄大鼠的耳蜗侧壁组织进行MC的原代培养,经选择性消化、差异性贴壁等手段纯化MC后,将MC和SV40在无血清DMEM条件下共培养三天,经2%新生牛血清选择培养三天,通过形态学的变化及增殖能力的变化粗筛出MC系;通过观察MC系的形态、生长特征,细胞角蛋白18、波形蛋白的免疫细胞化学,RT-PCR检测SV40 T抗原、IsK,细胞记数法及流式细胞术分析其生长情况及染色体倍型,软琼脂培养、裸鼠致瘤实验等鉴定MC-C3系.结果 MC-C3系基本保持了原代MC的表型特征:多角形外观、细胞间连接紧密,单层时呈"铺路石样"外观,dome形成能力等形态、生长特征;细胞角蛋白18、波形蛋白表达双阳性;不同世代的MC-C3均有SV40 T抗原、IsK的表达.MC-C3为二倍体细胞.软琼脂培养和裸鼠致瘤实验阴性.该系目前已培养5月,超过20代,传代时间为4～5天,传代比例为1:2～3.液氮中保存有不同世代的细胞.结论 本实验成功的建立了大鼠边缘细胞的永生细胞系,初步鉴定表明MC-C3基本保留了原代边缘细胞的表型特征,又不具有瘤细胞的特征.为边缘细胞功能的研究,特别是电生理、分子生物学方面的研究打下了良好的基础.
关键词： 边缘细胞 永生细胞系 猿猴肉瘤病毒(SV40) IsK
