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直流电场对炎症微环境下的rBMSCs成骨的影响
目的:探究直流微电场(DCEF)对炎症微环境下的大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)成骨分化作用的影响.方法:提取、培养及鉴定rBMSCs;以10mg/ml的TNF-α诱发细胞炎症反应,采用ELISA及实时定量PCR检测IL-1β及TNF-α的分泌量及基因表达;对正常rBMSCs(H-rBMSCs)组及炎症微环境下rBMSCs(H+cytokines)组加载DCEF,MTT法测生长曲线,茜素红染色及钙离子沉积量检测,实时定量PCR检测成骨基因BSP、OCN、Rumx2的表达,Western blot检测成骨蛋白ALP及Runx2的表达量.结果:H+cytokines组细胞IL-1β及TNF-α的分泌量均明显高于H-rBMSCs组(35.6±3.0比12.2±1.5;49.2±3.5比14.9±2.1,P＜0.05);H+cytokines组IL-1β及TNF-α基因表达水平分别是H-rBMSCs组2.5倍、2.2倍;H+cytokines+DCEF组及H-rBMSCs+DCEF组BSP、OCN、Runx2基因表达水平及ALP、Runx2蛋白表达水平分别高于H+cytokines组及H-rBMSCs(P＜0.05),H+cytokines+D CEF组部分成骨能力指标高于H-rBMSCs(ALP蛋白表达水平:0.95±0.08比0.43±0.04,Runx2蛋白表达水平:0.85±0.08比0.31±0.04;P＜0.05).结论:DCEF可促进炎症微环境下的rBMSCs增殖及成骨分化.
关键词： 大鼠骨髓间充质干细胞 炎症 成骨分化 直流微电场 -
直流微电场对钛种植体骨结合影响的初步研究
目的:初步探究直流微电场对钛种植体骨结合的影响.方法:建立大鼠胫骨种植体模型,加载直流微电场,4周或8周后分别进行种植体周围骨密度的测量,扭矩值的测定,硬组织磨片的分析.结果:实验组种植体接触率明显高于对照组,实验组骨小梁问隔明显低于对照组(P＜0.05).第4周及第8周实验组大鼠种植体的平均旋出扭矩值均明显高于对照组(P＜0.05).第4周实验组大鼠种植体骨结合率明显高于对照组,种植体周骨小梁面积百分数升高明显(JP＜0.05).组织学结果显示:加载电场后,骨组织向种植体表面延伸生长,高倍镜下可见其形态类似于“伪足”.直流微电场组其标本钙化及未完全钙化骨组织密集,与种植体的附着密度大,骨质致密,且骨质成熟度高,而对照组种植体周围骨组织稀疏,新生骨小梁间隔明显偏大,小梁间的网格状结构明显不如实验组密集,骨成熟度及与种植体的粘附程度均稍差.结论:直流微电场可增强SD大鼠胫骨种植体周骨密度,促进骨结合.
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微电场刺激血管内皮细胞培养上清对缺氧培养滋养细胞迁移／侵袭的影响
目的：探讨微电场（electric field，EF）刺激血管内皮细胞培养上清对缺氧培养滋养细胞迁移／侵袭能力的影响。方法200 mV／mm 微电场刺激血管内皮细胞（HUVEC）5 h，收集培养上清。 Transwell 体外侵袭实验和划痕实验观察 EF 刺激内皮细胞条件培养基对3％ O2物理缺氧培养滋养细胞迁移／侵袭功能的影响。采用 Western blot 和荧光定量 RT－PCR 检测 EF刺激的血管内皮细胞条件培养基与滋养细胞共培养24 h 后对缺氧培养滋养细胞 MMP－2（Matrix metalloproteinase 2，MMP－2）及MMP－9（Matrix metalloproteinase 9，MMP－9）分子表达的影响。结果Transwell 小室体外侵袭实验和划痕实验结果显示，EF 200 mV／mm 刺激血管内皮细胞5 h 条件培养基（conditioned medium，CM）与滋养细胞共培养，可促进缺氧培养滋养细胞迁移／侵袭功能，其穿膜细胞数目是单纯缺氧的3．62倍（P ＜0．05），迁移速度是单纯缺氧的1．56倍（P ＜0．05）。 EF 刺激的血管内皮细胞条件培养基与滋养细胞共培养24 h，可以促进缺氧培养滋养细胞的 MMP－2表达；对 MMP－9分子表达的影响不明显。结论EF 刺激的血管内皮细胞培养上清能促进缺氧培养滋养细胞的迁移／侵袭能力，可能与内皮细胞作用于滋养细胞、促进 MMP－2分子表达增加有关。
