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巴沙鱼脱细胞鱼皮基质制备与生物相容性评价
目的:探究五种交联条件下的巴沙鱼皮脱细胞真皮基质的生物安全性及相容性,为鱼源脱细胞鱼皮基质研制提供实验依据.方法:巴沙鱼皮为原料,通过一系列方法制备5种低免疫原性的巴沙鱼皮脱细胞基质.据国标制备不同浓度浸提液进行体外毒性实验.依据CCK-8检测初步筛选出不同浓度浸提液(10g/L、100g/L)中符合国际标准(100g/L)的材料;再将筛选出来的材料进行扫描电镜观察材料结构,HE和Masson观察材料是否完全脱细胞;通过血液相容性、Live/Dead、Tunel、Annexin V等方法进行细胞相容性及体外毒性研究.结果:CCK-8得出10g/L浓度下,120℃交联和未交联巴沙鱼材料细胞活性＞70％,其余三种材料细胞活性均＜70％;100g/L浓度下,筛选出来的两种材料高温120℃交联和未交联巴沙鱼脱细胞真皮基质材料细胞活性均＞70％.扫描电镜观察得样品呈双层膜结构,一侧疏松多孔,一侧致密光滑.HE染色观察到粉红色条状分布的胶原纤维色,Masson结果与HE染色相一致.溶血率＜5％,凋亡实验中120°交联及未交联巴沙鱼材料、空白组细胞死亡率分别为4.73％,15.21％,0.89％;细胞凋亡率为4.17％,2.83％,2.54％.结论:实验表明,本研究中只有120°高温交联和未交联巴沙鱼脱细胞基质对细胞无毒性,材料安全性能高,具有良好的组织相容性,相对促进细胞生长,其中未交联巴沙鱼材料还需改进,高温120°交联巴沙鱼脱细胞真皮基质材料为佳材料.为开展水生生物脱细胞真皮基质的研究提供理论基础以及技术指导.
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巴沙鱼皮胶原蛋白的提取、组成及变性温度研究
目的 从巴沙鱼皮中提取胶原蛋白并分析其结构类型及氨基酸组成,同时研究物理、化学交联法对其变性温度的影响.方法 采用酸提法和酶提法提取巴沙鱼皮中的胶原蛋白,并用SDS-PAGE凝胶电泳、FTIR和HPLC分析胶原蛋白的结构类型和氨基酸组成.通过测定黏度值研究物理、化学交联法对其变性温度的影响.结果 酸提法提取胶原蛋白的提取率为58.2％,酶提法的提取率为22.0％;巴沙鱼皮鱼胶原蛋白为Ⅰ型胶原蛋白;经120℃热交联后,巴沙鱼皮胶原蛋白的变性温度从34.2℃下降至28.0℃,经四甲基乙二胺(EDC)交联后,其变性温度上升至35.8℃.结论 巴沙鱼皮富含Ⅰ型胶原蛋白,酸提法比酶提法提取效率高,采用化学交联法可提高其变性温度,因而巴沙鱼皮可作为胶原蛋白的重要来源,可用于制备多种生物医用材料,具广泛的应用前景.
