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表没食子儿茶素没食子酸酯对人牙周膜细胞增殖及成骨分化的影响
目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cell,hPDLC)增殖及成骨分化的影响,探讨其对促进牙周骨组织再生的作用.方法 收集新鲜拔除的前磨牙,分离其牙周韧带并进行hPDLC原代培养.取第4代hPDLC,分别给予0、2、4、6、8、10 μmol/L EGCG处理,处理24、48、72 h时采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(cell counting kit,CCK)检测细胞增殖情况,培养第7、14天时检测碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性,培养第21天时采用茜素红对矿化结节进行染色及定量分析,处理7d时采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor-2,Runx2)、ALP和Ⅰ型胶原的表达情况.结果 4μmol/L EGCG作用于hPDLC 24 h时促进细胞增殖,8、10 μmol/L EGCG作用于hPDLC 24、72h时抑制细胞增殖.2、4、6、8、10 μmol/L EGCG成骨诱导21 d时均可见红染的矿化物,hPDLC吸光度值分别为0.119±0.001、0.167±0.003、0.173±0.003、0.110±0.001、0.083±0.003,除10 μmol/LEGCG组与无EGCG组(0.077±0.001)间差异无统计学意义外,其余组均显著高于无EGCG组(P值均＜0.05).各浓度EGCG均可促进细胞Ⅰ型胶原、ALP表达,其中4、6 μmol/L效果显著;4、6μmol/LEGCG可促进细胞Runx2表达,且4μmol/L组促进效果优于6μmol/L组.结论 4μmol/LEGCG在早期对细胞增殖有促进作用,4～6 μmol/L EGCG能显著增强hPDLC的成骨向分化.
