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p75神经营养受体在胎鼠颌突外胚间充质干细胞体外矿化过程中表达变化的研究
目的 探讨不同胚龄SD大鼠胎鼠颌突外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSC)的体外矿化能力,以及p75神经营养受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在矿化过程中的表达变化,揭示p75NTR在牙齿硬组织矿化中的调控作用与机制.方法 分离培养孕12.5 d (E12.5 d)、E15.5 d和E18.5 d的SD大鼠胎鼠颌突EMSC,通过流式检测技术对比各组细胞群的细胞表型;分别对E12.5 d、E15.5 d和E18.5 d的EMSC进行体外矿化诱导,7d后进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测,21d后茜素红染色观察矿化结节形成情况,同时采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测0、7、14和21 d的Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor2,RUNX2)、Ⅰ型胶原、ALP和p75NTR的表达情况.结果 细胞表面特异性标志物CD29、CD146和p75NTR在E12.5 d、E15.5 d和E18.5 d的EMSC中均呈阳性表达,CD45为阴性表达,其中p75NTR在E18.5 d的EMSC中阳性表达率为84.04％,高于E12.5 d(22.53％)和E15.5 d(81.43％);诱导21 d后茜素红染色显示,E18.5 d的EMSC实验组矿化能力较强,ALP活性变化趋势与茜素红染色结果一致;蛋白质印迹法结果显示:RUNX2、Ⅰ型胶原表达量在E18.5d的EMSC实验组(RUNX2:1.92±0.20,Ⅰ型胶原:1.85±0.66)显著高于E12.5 d(RUNX2:0.38±0.02,Ⅰ型胶原:0.33±0.94)和E15.5 d组(RUNX2:0.72±0.22,Ⅰ型胶原:0.64±0.07)(P＜0.05),p75NTR的表达在诱导21d的实验组(E12.5 d:0.79±0.23、E15.5 d:0.84±0.29、E18.5 d:1.35±0.22)均显著高于相同时间点对照组(E12.5 d:0.42±0.12、E15.5 d:0.43±0.13、E18.5 d:0.48±0.15) (P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义;实时定量PCR结果进一步印证了蛋白质印迹法结果.结论 p75NTR参与EMSC的矿化过程,E18.5 d的EMSC矿化能力强,p75NTR表达量高,是牙组织工程较理想的种子细胞.
