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DNAX相关蛋白12信号通路在压应力诱导小鼠单核细胞向破骨细胞分化中的作用
目的 探讨DNAX相关蛋白12( DNAX-associated protein 12,DAP12)信号通路在压应力诱导小鼠单核细胞向破骨细胞分化过程中的作用,以期阐明正畸治疗过程中牙槽骨破骨细胞分化的调节机制.方法 以小鼠单核细胞RAW264.7为研究对象,构建并导入DAP12短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒,分为DAP12-shRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,采用四点弯曲体外细胞加载装置加载压应力,以反转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法分别检测DAP12、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase TRAP)、非受体酪氨酸激酶家族Btk和Tec激酶、活化T细胞核因子1( nuclear factor of activated T cells 1,NFATc1)mRNA和蛋白的表达情况.结果 与阴性对照组(0.385 ±0.021)和空白对照组(0.391 ±0.009)相比,DAP12-shRNA干扰组DAP12 mRNA表达水平(0.112 ±0.025)明显降低(P＜0.05)；DAP12-shRNA干扰组DAP12蛋白表达(0.193 ±0.015)显著低于阴性对照组(0.526±0.006)和空白对照组(0.514±0.024) (P ＜0.05).干扰组内与压应力刺激细胞0 h(0.497 ±0.031)相比,加力6 h(0.671±0.031)和加力12 h(0.800±0.043) TRAP mRNA表达显著增加(P＜0.05),但各对应时间点的表达均比阴性对照组弱(3、6、12 h)(P ＜0.05).受压应力刺激DAP12-shRNA干扰组Btk、Tec、NFATc1的表达虽然随加力时间的增加而增加,但各时间点(6、12 h)与阴性对照组比均显著减少(P＜0.05).结论 DAP12信号通路存在并参与调节压应力刺激诱导的破骨细胞分化,DAP12在其中起重要作用.
