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人类近日节律基因1文献资料
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hper1干扰质粒的构建及hper1功能的初步研究
目的构建高效的针对hper1(人类period1基因)的干扰质粒,并对hper1的功能进行初步研究.方法选择4个hper1的干扰位点,根据位点序列合成构建4个pTER-hper1干扰质粒,并通过测序验证.将4种干扰质粒分别转染至SH-SY5Y细胞,经马血清休克诱导后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测hper1mRNA的表达,鉴定干扰效果.提取细胞总蛋白,Western Blot 检测P-p44/42丝裂原活化蛋白激酶(mitagen-actinated pratein kinase,MAPK)表达.结果 RT-PCR鉴定显示pTER-hper1-Ⅱ干扰质粒干扰效率高,hper1表达量降低84.9%.Western Blot显示hper1表达受抑制后,P-p44/42 MAPK水平升高.结论成功构建并筛选到具有显著干扰效率的pTER-hper1干扰质粒,为进一步研究hper1的功能奠定了基础,并发现hper1对MAPK通路具有负相调控作用.
