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单细胞荧光显微测钙系统软件的设计和实现
目的开发Windows操作系统下基于双波长荧光测钙原理的荧光显微测钙系统软件.方法通过分析单色光源的工作原理得到输出波长和电压之间的函数关系,并以此作为设计软件算法的依据;采用编程框架(MFC)中的应用程序框架和多线程技术,用VC+ +6.0 开发Windows下的应用软件.结果在PC机上实现了荧光显微测钙软件,并用该软件、PC机、单色光源、荧光显微镜、光电倍增管以及数据采集器构建的荧光测钙系统,实现了单个活体β细胞的胞内游离钙离子浓度的测量,测量结果在正常生理范围内.结论软件能够准确测量出活体细胞内游离钙离子浓度,为细胞生物物理研究提供了一种有效的工具.
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代谢抑制处理后大鼠心室肌细胞反向Na+/Ca2+交换体转运功能的变化
目的:利用荧光标记法观察代谢抑制处理后,大鼠心肌细胞反向Na+/Ca2+交换体(NCX)转运功能的变化.方法:酶解法分离制备钙耐受心肌细胞用Fura-2/AM负载,采用双激发荧光光电倍增系统(IonOptix Photometry System)检测钙信号.结果:细胞置于无Na+液后,可见[Ca2+]i逐渐升高,L-型Ca2+通道阻断剂nifedipine在浓度为1μmol/L时,不影响此现象;而NCX的抑制剂Ni2+,在浓度为1 mmol/L时,则完全阻断[Ca2+]i的升高.采用20mmol/L乳酸加10 mmol/L脱氧葡萄糖作为代谢抑制物处理心肌细胞不同时间,正常Tyrode液灌流10 min,之后检测无Na+液引发[Ca2+]i升高效应的变化,发现5 min处理与对照组无显著性差异,10和30 min处理后此效应逐渐减弱.结论:首次发现,代谢抑制处理后心肌NCX的反向转运功能被抑制,阐明其调节机制,将为心肌缺血/再灌注损伤的治疗提供新思路.
