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Ni-NTA离子螯合纯化文献资料
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三种方法纯化生物工程抗体片段的比较
比较3种不同纯化体系纯化生物工程抗-HBsFab的效率和效果,寻求高效、经济的生物工程产品批量纯化方法.采用增菌发酵抗-HBsFab阳性克隆,超声破菌法制备Fab上清.分别缓冲平衡抗Fab-Sepharose亲合胶、链球菌蛋白G(prot.G)-Sepharose胶和Ni-NTA离子螯合胶,对Fab上清进行过柱纯化.紫外光检测目的蛋白得率,SDS-PAGE鉴定产物的纯度并用HBsAg包被ELISA检测其生物活性.结果显示,等容积不同类别的胶体对目的蛋白的纯化效率依次为:Ni-NTA离子螯合胶prot.G-Sepharose胶＞抗-Fab-Sepharose亲合胶;在各胶体饱和结合能力之内,3种方法皆可获高纯度产品,在SDS-PAGE中呈现单一区带;HBsAg包被ELISA检测结果为3种方法纯化制备的Fab在抗原结合能力上未显示明显差别.提示,3种纯化方法各有优势和应用限制,Ni-NTA法在经济性、实用性和纯化效率上明显优于其他两种方法.
