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核糖核酸酶保护法文献资料
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人肠上皮细胞内毒素低反应性及其机制探讨
为探讨人正常肠上皮细胞对内毒素(LPS)刺激低反应性的机制,用ELISA法检测LPS刺激肠上皮细胞18h后IL-8的分泌水平,用RT-PCR及RPA法检测肠上皮细胞LPS跨膜信号转导相关受体TLR4、TLR2、CD14和MD2 mRNA的表达及LPS刺激对其表达的影响.结果表明,LPS刺激不能引起肠上皮细胞IL-8的分泌,而IL-1β刺激却能引起其分泌;人正常肠上皮细胞TLR4、TLR2、CD14和MD2 mRNA的表达均较弱.LPS刺激后,TLR4、CD14和MD2 mRNA表达进一步降低,而TLR2的表达无显著变化.说明肠上皮细胞对LPS的低反应性与细胞表面LPS相关受体低表达有一定的内在联系,从而进一步证实TLR4、CD14、MD2在介导LPS跨膜信号转导中起重要作用.
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核糖核酸酶保护法MD-2探针的制备
目的构建用于核糖核酸酶保护法的MD-2转录质粒并制备反义RNA探针.方法 PCR扩增目的片段,并定向亚克隆至pSP72质粒T7启动子下游的多克隆位点,以T7 RNA聚合酶转录合成反义RNA探针.结果亚克隆插入的片段经测序、酶切鉴定,序列及方向完全正确,成功制备了用于的反义RNA探针.结论成功地制备了用于核糖核酸酶保护法的MD-2转录模板和探针,为深入研究内毒素信号受体相关机制以及MD-2的基因表达创造了必要的条件.
