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NleF文献资料
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肠出血性大肠杆菌O157∶H7Ⅲ型分泌系统效应蛋白NleF基因敲除菌株的构建及其生物学功能初探
目的：构建肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）O157∶H7 T3SS效应蛋白NleF敲除菌株和回复菌株，研究其对细菌生长和细胞死亡的影响。方法利用λ-Red同源重组的方法构建nleF基因敲除菌株ΔnleF；将pET-24a（＋）-NleF重组质粒导入敲除菌感受态细胞中构建回复菌株ΔnleF／NleF。将野生株、敲除株和回复株分别用LB和DMEM（10％FBS）培养，每隔1 h测定D600，绘制生长曲线；分别用3种菌株感染HeLa细胞，用细胞毒性试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶（ LDH）的释放量，计算细胞毒性。结果成功构建NleF敲除菌株ΔnleF和回复菌株ΔnleF／NleF；野生株、敲除株和回复株三者的生长速率无明显差异；与野生株相比，ΔnleF感染HeLa细胞后，细胞毒性增加，ΔnleF／NleF感染后HeLa细胞毒性与野生株相当。结论 EHEC O157∶H7 T3SS 效应蛋白NleF对细菌的生长无明显影响，但可能抑制由细菌感染引起的宿主细胞死亡。
