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人胚胎肾293A细胞文献资料
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血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS－1细胞中的转染
目的：利用人胚肾（HEK）293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体（AT2R）基因的重组腺病毒，并在大鼠胰岛素瘤细胞INS－1细胞株中进行转染，构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和对照病毒Ad－CMV－EGFP，并测定病毒滴度。在INS－1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western 印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad－G－AT2R－EGFP和Ad－CMV－EGFP的滴度分别为9×109和8×109 pfu／ml。在INS－1细胞中转染Ad－G－AT2R－EGFP后，AT2R mRNA的表达随病毒感染复数（multiplicity of infection，MOI）值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时，AT2R mRNA的表达达到峰值（P＜0．05），同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad－CMV－EG－FP的细胞和未转染细胞，但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体，并将其转染入INS－1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型，为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。
关键词： 受体 血管紧张素 2型 腺病毒科 人胚胎肾293A细胞 大鼠 胰岛素瘤INS-1细胞
