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体外核酸扩增技术文献资料
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单引物耐热链替代扩增HBV X区方法的初步探讨
目的:以HBV X区为模型,对单引物耐热链替代扩增(SDA)反应的影响因素进行初步探讨.SDA是一种等温的体外核酸扩增技术,其主要依据限制性内切酶识别并切割半硫酸磷酸化DNA未修饰链(即打缺口)以及5′→3′外切酶缺陷的DNA聚合酶在切口处聚合延伸并替代下游链的特性,这种"打缺口-聚合/替代"不断循环往复,达到靶序列的扩增.方法:以HBV为模型,设计一条典型的SDA引物(含5′悬端、BsoBⅠ酶切位点及3′端靶序列互补区),采用耐热BsoBⅠ/Bst DNA聚合酶53℃恒温反应体系,微孔板杂交检测终产物.结果与结论:对SDA反应的重要的影响因素进行了初步探讨,并实现了SDA对模板的线性扩增.
