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RNA-蛋白相互作用文献资料
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基于MS2衣壳蛋白系统的活细胞内Jun mRNA定位初探
目的 检测细胞中Jun mRNA在活细胞内的定位.方法 设计引物,构建融合MS2茎环结构串联重复的Jun表达载体(pcDNA3.1-Jun-MS2-48X).转染细胞后,绿色荧光蛋白(GFP)-MS2融合蛋白可与MS2茎环串联重复结构结合,通过荧光显微镜观察GFP的细胞定位,能够间接确定Jun mRNA在细胞内的定位.结果 成功构建了pcDNA3.1-Jun-MS2-48X表达载体,经荧光显微镜观察,能够看到明显的绿色荧光,并且在细胞内聚集.结论 实现了在细胞内实时观察Jun mRNA,为在单细胞水平上Jun mRNA的定位提供了新的技术方法.
关键词： GFP-MS2融合蛋白 mRNA胞内定位 RNA-蛋白相互作用 Jun -
串联MS2衣壳蛋白和MS2特异结合RNA表达载体构建及应用
目的 构建体内研究RNA-蛋白相互作用的表达载体.方法 利用MS衣壳蛋白可与MS2结合位点(MS2bs)RNA特异性结合的特点,通过设计特异引物,构建pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,以及表达MEG3非编码RNA的表达载体pcDNA3.0-MEG3VI-12XMS2bs.共转染细胞,进行RNA免疫沉淀,所得RNA进行实时定量PCR分析验证.结果 成功构建了pcDNA3.0-Flag-2XMS2和pcDNA3.0-12XMS2bs表达载体,实时定量PCR结果表明,与对照相比能明显富集MEG3V1非编码RNA分子.结论 成功构建了体内研究RNA-蛋白质相互作用的表达载体,为RNA-蛋白相互作用研究提供了新的技术方法.
关键词： MS2衣壳蛋白 RNA-蛋白相互作用 RNA结合蛋白
