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WDR12文献资料
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诱导敲低WDR12对T387细胞增殖和自我更新的影响研究
目的 构建诱导敲低WDR12的慢病毒质粒并借助慢病毒感染体系,建立诱导敲低WDR12的T387细胞株,检验WDR12基因敲除效率及其对T387细胞增殖和自我更新的影响.方法 选取靶向WDR12基因的siRNA序列,将人工合成的片段克隆到pLKO-Tet-On质粒载体上,并对单克隆进行测序以验证序列正确性.借助慢病毒感染体系将构建好的慢病毒质粒进行病毒包装并感染T387细胞株,使用嘌呤霉素筛选后利用多西环素诱导敲低WDR12蛋白.随后通过Western印迹实验检测WDR12蛋白干涉效果;通过测定干涉后细胞活力以反映敲低WDR12蛋白对胶质瘤干细胞(GSC)增殖能力的影响;通过肿瘤细胞球形成实验观察敲低WDR12蛋白对GSC自我更新能力的影响.结果 经测序验证,2个不同序列的WDR12诱导敲低慢病毒质粒均已成功构建.经Western印迹检测,2条干涉序列均能在T387细胞株中显著降低WDR12蛋白的表达,并在敲低WDR12蛋白后,T387细胞的细胞活力和肿瘤细胞球形成能力均受到显著抑制.结论 借助慢病毒感染体系成功构建了诱导敲低WDR12的T387细胞株,发现敲低WDR12蛋白能显著抑制GSC的增殖和自我更新.
