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功能未知基因文献资料
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功能未知基因LOC410296的表达载体构建及小鼠抗血清制备
目的：为深入研究功能未知基因LOC401296，首先获取其全长序列，实现LOC401296分子的真核和原核表达，并制备针对 LOC401296蛋白的抗血清。方法采用 PCR 方法克隆 LOC401296编码区全长序列，利用pET28B和pCMV-Myc质粒构建LOC401296原核表达和真核表达载体，用异丙基硫代半乳糖苷（ IPTG）诱导目的蛋白原核表达，目的蛋白经纯化、复性后免疫小鼠制备抗血清。结果 PCR克隆得到LOC401296编码区全长序列，成功构建LOC401296原核及真核表达载体，IPTG诱导目的蛋白在大肠杆菌体内表达，用纯化蛋白免疫小鼠获得抗人LOC401296蛋白血清， ELISA检测抗血清效价达1∶64000，Western印迹证实LOC401296真核表达载体成功表达且抗血清特异性良好。结论获得LOC401296基因编码区全长序列，成功构建了LOC401296基因表达载体，分别在大肠杆菌和真核细胞内实现LOC401296蛋白原核表达和真核表达，获得小鼠抗人LOC401296蛋白抗血清，为LOC401296基因功能研究奠定了基础。
