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人γ干扰素基因转染成肌细胞在治疗骨骼肌损伤中的应用
目的:构建转入γ干扰素(human interferon γ,hIFNy)基因的成肌细胞,探讨hIFN7对小鼠急性钝挫伤骨骼肌修复过程的影响.方法:①应用基因重组技术,将hIFN7基因克隆到pEGFP-C2真核表达载体中,以酶切和测序方法鉴定重组质粒pEGFP-C2-hIFN7的正确性;②经脂质体介导转染C2C12成肌细胞,用RT-PCR和Western Blot法检测转基因细胞的hIFN7表达.③64只7～12周雄性C3H小鼠,制作右侧腓肠肌钝挫伤动物模型,随机分成4组,即A组(注射hIFN7),B组(注射转hIFN7的C2C12细胞),C组(注射空白成肌细胞),D组(未干预).挫伤后第10天,A、B、C组的小鼠,于腓肠肌损伤局部注射不同药物,D组不进行干预以作为自然愈合对照.分别于伤后7、14、28、42天,从各组中随机抽取4只小鼠进行右侧腓肠肌损伤部位取材,以荧光定量PCR和免疫荧光化学染色检测不同时间点波形蛋白(Vimentin)及Ⅱb型肌球蛋白重链(MHC-Ⅱb)的表达.结果:①酶切和测序结果均证实成功构建了hIFNγ真核表达质粒pEGFP-C2γhIFN7,RT-PCR和Western Blot检测到转染细胞中hIFNγ基因的表达;②干预后各时间点,A、B组小鼠损伤骨骼肌Vimentin表达较C组和D组降低;伤后42天,B组损伤骨骼肌Vimentin表达低于A组,其余时间点A、B两组间无显著差异;③各组MHCⅡb表达无明显差异.结论:①成功制备了含hIFNγ基因的真核表达质粒,转染后获得了高效表达hIFNγ的鼠C2C12成肌细胞;②采用转染hIFNγ的C2C12成肌细胞局部注射,可以抑制骨骼肌纤维化标志产物波形蛋白的表达,与注射外源性IFNγ的作用近似.③局部注射转hIFNγ基因的成肌细胞或外源性IFNγ,未发现对骨骼肌再生标志产物MHC-Ⅱb表达有明显影响.
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转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ基因成肌细胞对骨骼肌急性钝挫伤后Ⅱb型肌球蛋白重链及波形蛋白mRNA表达的影响
目的:观察转人类胰岛素样生长因子-Ⅰ(Human Insulin-like Growth Factor-Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因成肌细胞回输小鼠骨骼肌钝挫伤局部后,对小鼠骨骼肌愈合过程中Ⅱb型肌球蛋白重链(Myosin Heavy Chain-Ⅱb, MHC-Ⅱb)及波形蛋白(Vimentin)mRNA表达的影响.方法:将90只7～12周雄性C3H小鼠右下肢腓肠肌中段内侧实施急性钝挫伤后,随机分为自然愈合组、单纯成肌细胞注射组和转基因成肌细胞注射组.挫伤后第3天, 对单纯成肌细胞注射组、转基因成肌细胞注射组损伤局部分别注射等量单纯成肌细胞和转基因成肌细胞,并于损伤后第1、5、10、20、30天取材.检测不同时间点MHC-Ⅱb和Vimentin mRNA表达水平,观察比较各组骨骼肌修复情况.结果:(1)在急性骨骼肌钝挫伤修复期,3组小鼠骨骼肌MHC-Ⅱb mRNA均明显升高,第20天达到峰值.转基因成肌细胞注射组MHC-Ⅱb mRNA表达水平高,其次为单纯成肌细胞注射组.(2) 急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,转基因成肌细胞注射组Vimentin mRNA的表达水平始终在3组中表达低.结论:急性骨骼肌钝挫伤修复过程中,注射转基因成肌细胞能提高损伤后MHC-IIb mRNA表达水平,促进肌纤维的增生,加速骨骼肌愈合进程.同时,损伤局部注射转hIGF-Ⅰ基因的成肌细胞后,使得损伤局部Vimentin mRNA表达低于另两组,一定程度上抑制了骨骼肌的纤维化程度,有助于提高肌肉的质量.
关键词： 转人类胰岛素样生长因子-1 Ⅱb型肌球蛋白重链 波形蛋白 成肌细胞 修复 -
低功率激光照射促进大鼠急性骨骼肌钝挫伤肌肉再生
目的 探讨635 nm GaAlAs激光照射对急性骨骼肌钝挫伤大鼠组织学愈合进程及腓肠肌Ⅱb型肌球蛋白重链(MHC-Ⅱb)mRNA表达的影响.方法 建立大鼠急性骨骼肌钝挫伤模型,激光治疗组采用美国Erchonia EML(ML2)型低功率GaALAs激光器在钝挫伤局部进行照射,正常对照组、自然愈合组不进行照射.通过HE染色光镜观察、透射电镜观察和实时荧光定量PCR法,对损伤区域腓肠肌进行形态学和分子生物学研究.结果 HE染色光镜观察和电镜观察结果 显示,激光照射组肌肉再生速度显著快于自然愈合组,且胶原纤维生成很少;激光治疗组腓肠肌MHC-Ⅱb mRNA的表达量在损伤后第2、3、7天显著高于自然愈合组.结论 635 nm GaAlAs激光能促进急性骨骼肌钝挫伤模型大鼠腓肠肌MHC-Ⅱb mRNA的表达,从而促进肌肉再生,提高愈合质量.
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青白散对慢性软组织损伤大鼠骨骼肌Ⅱb型肌球蛋白重链及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响
目的 观察青白散对慢性软组织损伤大鼠骨骼肌中Ⅱb型肌球蛋白重链(myosin heavy chain；MHC)及Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagen-Ⅰ和collagen -Ⅲ)蛋白表达的影响.方法 72只雄性SD大鼠随机分为模型对照组、云南白药组、青白散组,每组24只.采用慢性软组织损伤动物模型,分别予以生理盐水、云南白药和青白散灌胃.于给药后第1周末、第2周末、第3周末,用免疫组织化学方法检测大鼠慢性软组织损伤后骨骼肌中MHC -Ⅱb蛋白及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达,并分析其相关性.结果 青白散组在不同时间点的骨骼肌中MHC -Ⅱb蛋白表达水平均较模型对照组显著增高,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达水平均较模型对照组显著降低.结论 青白散能显著促进大鼠慢性损伤骨骼肌中MHC -Ⅱb蛋白表达,阻止Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达过度增高,从而有利于损伤组织的修复.
