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pEgr-p16文献资料
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辐射诱导表达载体pEgr-p16的构建及其体外蛋白表达的研究
目的构建辐射诱导表达载体pEgr-p16并研究其体外稳定转染联合60Co γ射线照射对人宫颈癌HeLa细胞p16蛋白表达变化的影响.方法利用双酶切、粘端连接的方法构建了含有辐射诱导特性的早期生长反应因子Egr-1和p16的pEgr-p16的质粒载体,以脂质体介导的方法,将重组载体导入人HeLa细胞,采用免疫细胞化学和流式细胞术的方法检测照射转染后的HeLa细胞p16蛋白表达的变化.结果经全自动测序证明辐射诱导表达载体pEgr-p16构建正确;稳定转染可见有明显的p16表达增强;5 Gy以内p16蛋白表达呈剂量依赖性的增加,在2 Gy照射后2 h p16蛋白表达水平即开始增高,4 h达到高,12 h趋于正常水平.结论本研究成功构建了辐射诱导表达载体pEgr-p16,在HeLa细胞中蛋白表达明显增强.
