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老瓜头生物总碱抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖及促凋亡作用的研究
目的 研究老瓜头生物总碱对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制与促进凋亡的作用.方法 采用小鼠黑色素瘤B16细胞,MTT法检测老瓜头生物总碱对B16细胞增殖的抑制作用,通过琼脂糖凝胶电泳、Hoechst 33258染色、Caspase-3和Caspase-8活性检测,观察老瓜头生物总碱诱导细胞凋亡的作用和机制.结果 MTT检测显示老瓜头生物总碱抑制B16细胞的增殖,呈现时间依赖性和浓度依赖性,作用24、48、72 h的IC50分别为0.97、0.98、0.16 mg·L-1;选用浓度0.25、0.5、1mg·L-1老瓜头生物总碱孵育B16细胞24 h,经DNA Ladder检测出现阶梯状DNA Ladder,片段100～200 bp,呈现细胞凋亡裂解;0.5、1 mg·L-1老瓜头生物总碱孵育B16细胞24h后Rhodamine 123染色与空白对照组相比显示荧光降低,且随浓度增加,荧光降低增加;凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-8活性增强,0.5、1 mg ·L-1老瓜头生物总碱药物组与对照组相比有显著性差异(P ＜0.05,P＜0.01).结论 老瓜头生物总碱可抑制B16细胞增殖,诱导B16细胞凋亡,可通过增强凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8活性诱导凋亡.
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老瓜头生物总碱对LPS诱导RAW264.7细胞中COX-2酶活性、mRNA及蛋白表达的影响
目的:研究老瓜头生物总碱(TACKI)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7在COX-2酶活性、基因表达及蛋白表达的影响.方法:采用LPS诱导RAW264.7细胞作为炎症模型,以非甾体抗炎药选择性COX-2酶抑制剂塞来昔布作为阳性对照.MTT比色法分析TACKI对RAW264.7生长活性的影响,LPS长时间刺激RAW264.7,ELISA检测细胞上清液中前列腺素-E2(PGE2)活性,以PGE2的活性反映COX-2的酶活性,半定量RT-PCR检测RAW264.7细胞中COX-2 mRNA的表达,免疫荧光观察RAW264.7细胞中COX-2的表达,Western blotting法检测COX-2蛋白表达.结果:与LPS组比较,TACKI 0.1,1μg·L-1能减弱COX-2酶活性(P＜0.05),TACKI 0.01,0.1,1μg·L-1可下调COX-2 mRNA的表达(P＜0.05),TACKI 0.1,1 μg·L-1能减少COX-2蛋白表达(P＜0.05).结论:TACKI减弱LPS诱导RAW264.7细胞COX-2酶活性,对LPS诱导RAW264.7细胞中COX-2基因表达及蛋白表达抑制作用明显.
