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五肽对肠道病毒71型在人横纹肌肉瘤细胞和小鼠体内复制的抑制作用
肠道病毒71型(EV71)是手足口病(HFMD)主要的病原体之一.为研究小分子肽类化合物抑制EV71感染的作用,采用五肽分子作为干预分子,考察其对EV71在人横纹肌肉瘤(RD)细胞和乳鼠模型体内复制的影响.通过Western blotting、real-time PCR方法,检测EV71病毒蛋白和mRNA的表达水平,使用显微镜观察细胞病变效应.通过乳鼠体重变化和肠组织中EV71病毒VP1蛋白表达水平的变化来评价五肽体内抗病毒活性.结果表明,五肽分子P010157能够显著抑制RD细胞中EV71 VP1蛋白的表达,其质量浓度为100μg·mL-1时,EV71 vpl mRNA水平降低了(92.0±6.3)％,EC50约为2.2 μg·mL-1,且能有效抵抗病毒感染产生的细胞病变效应.通过MTS比色法测定P010157对RD细胞的细胞毒活性,结果显示其对细胞无明显毒性.体内实验结果还表明,P010157对感染EV71的乳鼠有保护作用(乳鼠无明显消瘦现象),并能抑制EV71在乳鼠体内的复制.本研究证实,P010157能有效抑制体外及体内的EV71的复制,是一种新型的对抗手足口病病毒EV71的化合物.
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肠道病毒71型激活人横纹肌肉瘤细胞中JNK1/2信号转导通路
目的 探讨c-Jun N端激酶(JNK)信号转导通路在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用.方法 台盼蓝染色法检测不同浓度抑制剂SP600125对人横纹肌肉瘤细胞(RD)活性的影响;实时荧光定量PCR及western blot检测EV71感染RD细胞后VP1 mRNA及蛋白质的表达水平;western blot检测JNK1/2、c-Fos、c-Jun蛋白及其磷酸化水平,并分析JNK1/2抑制剂SP600125对EV71复制及JNK1/2信号通路的影响.结果 台盼蓝染色结果表明,与空白对照组比较,5和10μmol/L实验组存活率差异无统计学意义(P均＞0.05),而20 μmol/L抑制剂组细胞存活率明显降低(P＜0.05);实时荧光定量PCR及western blot结果表明,与对照组相比,实验组在EV71感染RD细胞8h后,其VP1 mRNA及蛋白质的表达水平均明显下降(P均＜0.01).此外,western blot检测结果证实EV71感染RD细胞后,其JNK1/2、c-Fos和c-Jun的蛋白质磷酸化水平均明显升高(P均＜0.05).而经抑制剂SP600125处理可明显下调其JNK1/2、c-Fos、c-Jun磷酸化水平(P均＜0.05).结论 JNK1/2信号通路可被EV71感染有效激活,并与EV71复制有关.
关键词： JNK1/2信号通路 肠道病毒71型 人横纹肌肉瘤细胞
