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鼠源VH-CDR3文献资料
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抗VSTM1-v2细胞因子人源化单链抗体文库的构建及筛选
本文将鼠源VH-CDR3库(library of murine VH-CDR3)移植到特定的人源scFv (single-chain antibodyfragment) VH3-VK1框架构建人源化scFv文库,快速筛选抗VSTM 1-v2的人源化单链抗体.以抗VSTM1-v2鼠源eDNA为模板,扩增出鼠源VH-CDR3库,随后将鼠源VH-CDR3库移植到人源scFv (VH3-VK1)上并通过核糖体展示富集抗VSTM1-v2人源化scFv文库,该文库序列通过与原核基因表达调控等成分(N端添加T7启动子、SD序列和PelB序列、C端添加his标签序列和T7 terminal序列)拼接,构建表达型TA载体转化大肠杆菌BL21 (DE3)进行可溶性表达.终构建了一个库容达1012的人源化单链抗体文库,完成了1 000个克隆的初步鉴定,并筛选出EC50达21.35 nmol·L-1的抗VSTM 1-v2人源化scFv.该研究结果,一方面获得了具有潜在应用价值的抗-VSTM1-v2先导抗体；另一方面,为快速获得人源化抗体提供了一个新技术途径.
