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RP-HPLC法测定重组人胰岛素中胰岛素前体的含量
目的:建立反相高效液相色谱法测定重组人胰岛素中胰岛素前体的方法.方法:采用Grace Vydac C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱为分析柱,以乙腈-0.1％TFA水溶液(20:80)为流动相A,以乙腈-0.1％ TFA水溶液(80:20)为流动相B,梯度洗脱,流速为0.8 mL· min-1,检测波长为215 nm,柱温为40℃.结果:胰岛素前体在0.76～389.5μg· mL-1范围内峰面积与浓度有良好的线性关系(r=0.999 9),方法平均回收率为103.8％(n=9).结论:经方法学验证,本法能准确测定重组人胰岛素中胰岛素前体的含量.
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毕赤酵母表达人胰岛素前体的不均一性分析
目的 对毕赤酵母表达人胰岛素前体的不均一性进行分析.方法 应用疏水层析和C18反相制备,对毕赤酵母分泌表达的胰岛素前体蛋白进行分离纯化,纯化产物经SDS-PAGE、分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)、反相高效液相色谱(RP-HPLC)、质谱相对分子质量分析,并进行C-末端和N-末端测序.结果 SDS-PAGE测定为单一条带,SEC-HPLC测定为单一峰,但RP-HPLC检测结果出现2个峰;峰2相对分子质量为5 959,是正常的胰岛素前体,峰1为两种混合物,相对分子质量分别为5 716和5 816,可能是缺少了1～2个氨基酸产物;N-末端分别缺少了1个氨基酸(Phe)和2个氨基酸(Phe-Val),C-末端未发生降解.结论 利用毕赤酵母得到的人胰岛素前体存在不均一现象,为胰岛素制备提供了新思路.
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重组胰岛素前体转化成人胰岛素和地特胰岛素的工艺研究
胰岛素是治疗糖尿病常见药物,也是目前临床医学上糖尿病控制有效的药品,具有使用简单、研发安全有效,也是生物制药重要研究课题.糖尿病患者只要按时注射即可控制血糖,成为长效胰岛素药品首选.对此,笔者就重组胰岛素前体转化成人胰岛素与地特胰岛素工艺进行简要分析.
