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CHO-hm1R工程细胞株的建立及乙酰胆碱对其细胞内钙离子浓度的影响
目的获得表达人毒蕈碱样乙酰胆碱Ⅰ型受体(hm1R)的工程细胞株(CHO-hm1R)并鉴定表达受体是否具有相应的功能活性.方法以健康人基因组DNA为模板,PCR扩增hm1R之cDNA,并构建pcDNA3.1(+)-hm1R表达载体,转染CHO-K1细胞获得CHO-hm1R工程细胞株,将不同浓度的乙酰胆碱作用于细胞,以Fura-2为荧光探针检测细胞内钙离子浓度变化;同时,观察阿托品预处理对乙酰胆碱作用的影响.结果成功得到CHO-hm1R工程细胞株;乙酰胆碱10,100 μmol·L-1均可增高细胞内钙离子浓度,此反应可被阿托品500 μmol·L-1完全阻断.结论 CHO-hm1R工程细胞株可以用于hm1R配基的检测,为建立相关孤儿G蛋白偶联受体的研究体系提供借鉴.
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金纳米粒子对CHO-K1细胞毒性的谷胱甘肽作用机制
目的 探讨金纳米粒子(AuNP)对卵巢细胞CHO-K1的毒性作用及谷胱甘肽(GSH)的对抗作用.方法 AuNP 10～100 μmol·L-1作用卵巢细胞CHO-K1 72 h,MTT比色法检测细胞存活.AuNP 10 μmol·L-1,丁硫氨酸-亚砜亚胺(BSO)20 μmol·L-1及GSH 1 mmol·L-1单独或联合作用细胞72 h,MTT比色法检测细胞增殖,倒置相差显微镜观察细胞形态,AnnexinⅤ-FITC和PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡;AuNP 10 μmol·L-1,BSO 20 μmol·L-1及GSH 1 mmol·L-1单独或联合作用细胞48 h,共聚焦显微镜检测细胞骨架微丝,JC-1染色流式细胞仪检测线粒体膜电位.结果 AuNP 10～100 μmol·L-1对正常的CHO-K1细胞存活无明显影响.与正常对照组相比,AuNP 10 μmol·L-1 和BSO 20 μmol·L-1联合作用,可明显抑制CHO-K1细胞存活,抑制率为(80±2)%(P<0.01),胞体皱缩、变圆,细胞骨架微丝破坏;凋亡率为(66±6)%(P<0.01);细胞线粒体膜电位显著增加(P<0.01);加入外源性的GSH可逆转AuNP对因细胞GSH水平受抑而产生的细胞毒性.结论 AuNP对CHO-K1细胞损伤可能与GSH水平降低有关.
