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非选择性腺苷受体激动剂5'-N-乙基酰胺基腺苷的体外心肌保护作用及其机制研究
目的 研究腺苷A2A和A2B受体是否参与[5'-(N-ethylcarboxamido) adenosine,NECA]的抗心肌缺血再灌注损伤作用及其相关机制.方法 利用H9c2心肌细胞建立模拟缺血/再灌注损伤模型,给予非选择性腺苷受体激动剂5'-N-乙基酰胺基腺苷[5'-(N-ethylcarboxamido) adenosine,NECA]及选择性腺苷A2A受体拮抗剂(SCH58261,SCH)、选择性腺苷A2B受体拮抗剂(MRS1706,MRS),采用CCK-8法测定细胞活性、JC-1染色检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)、Amplex Red过氧化氢/过氧化物酶试剂盒测定细胞内H2O2水平,活性氧试剂盒检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,MitoSox Red超氧化物指示剂检测线粒体内活性氧水平.结果 5'-N-乙基酰胺基腺苷明显改善缺血/再灌注损伤引起的细胞活性和线粒体膜电位的降低,显著抑制缺血/再灌注损伤导致的细胞和线粒体内活性氧含量的升高,腺苷A2A及A2B受体拮抗剂均可阻断5'-N-乙基酰胺基腺苷的上述作用(P＜0.01或P＜0.05).结论 5'-N-乙基酰胺基腺苷可减轻H9c2心肌细胞的缺血/再灌注损伤,腺苷A2A、A2B受体共同参与5'-N-乙基酰胺基腺苷的心肌保护作用,其机制可能与调节线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)的开放及线粒体活性氧的产生有关.
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NECA对大鼠离体缺血再灌注心肌细胞自噬的调控作用
目的 观察非选择性腺苷受体激动剂5’-N-乙基酰胺基腺苷(NECA)对离体心肌缺血再灌注大鼠细胞自噬的调控作用.方法 将42只Wistar大鼠随机分为Sham组、I/R组、NECA组,各14只.Sham组心脏只穿线但不结扎缺血,用Kerbs-Henseleit缓冲液持续灌流170 min.I/R组、NECA组使用Langendorff装置制备大鼠离体心肌缺血再灌注损伤模型,且NECA组再灌注前分别给予含NECA的灌流液.透射电镜观察各组大鼠心肌超微结构的改变;Western blotting法检测自噬标志蛋白Beclin-1、LC3的表达.结果 Sham组、NECA组透射电镜下未见自噬体存在,但在I/R组可见多处典型的自噬现象.与Sham组相比,I/R组Beclin-1蛋白表达高、LC3Ⅱ/LC3 I高(P均＜0.05).与I/R组相比,NECA组Beclin-1蛋白表达低、LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ低(P均＜0.05).结论 NECA可通过降低大鼠心肌细胞自噬发挥心肌保护作用.
关键词： 5'-N-乙基酰胺基腺苷 心肌缺血再灌注损伤 自噬
