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不同表达体系重组人血白蛋白中糖蛋白的多重分析方法测定及质量评价
目的 用多种方法测定不同表达体系重组人血白蛋白中糖蛋白的含量,进行初步质量评价.方法 选择不同来源样品包括酿酒酵母表达的重组人血白蛋白、毕赤酵母表达的重组人血白蛋白、水稻表达的重组人血白蛋白、血浆来源的人血白蛋白,采用硫酸苯酚法、HPLC峰面积法、ConA结合洗脱HPLC定量法测定样品中糖蛋白含量.结果 硫酸苯酚法测定毕赤酵母表达体系的10批次样品,两个企业样品的甘露糖含量均值分别为2.7 mg·g(Pro)-1(A厂,n=4)和1.7 mg· g(Pro)-1(B厂,n=6);HPLC峰面积法测定整体上看毕赤酵母表达的重组人血白蛋白ConA结合蛋白峰面积百分比较高,分别为2.65％(A厂)及0.71％(B厂),而水稻表达的重组人血白蛋白ConA结合蛋白峰面积百分比较低,均值为0.05％(E厂,n=3),血浆来源的人血白蛋白ConA结合蛋白峰面积为0.01％(W厂);ConA结合后洗脱HPLC定量法测定毕赤酵母表达重组人血白蛋白ConA结合蛋白含量分别为27.58(A厂)、21.48(B厂)、32.02 mg·g(Pro)-1(C厂);酿酒酵母来源重组人血白蛋白ConA结合蛋白含量较低,仅为2.29 mg·g(Pro)-1(D厂);水稻来源重组人血白蛋白ConA结合蛋白含量低,为1.27 mg·g(Pro)-1(E厂);血浆来源人血白蛋白ConA结合蛋白含量为31.16 mg·g(Pro)-1(S厂).结论 就本实验涉及的样品和检测方法所获得的初步结果而言,重组人血白蛋白中均含有糖类蛋白,毕赤酵母表达体系样品中的糖类蛋白含量整体上高于酿酒酵母表达体系,水稻表达的重组人血白蛋白中糖类蛋白含量低(仅限现有分析条件),血浆来源的人血白蛋白中也含有糖类蛋白.
