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龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性及动力学影响的研究
目的 探讨龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的芳香胺Ⅳ-乙酰化转移酶(NAT)1的影响.方法 采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基笨甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性.观察不同浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响;通过改变底物PABA浓度,采用双倒数作图法,以底物PABA浓度的倒数(1/S)对NAT1反应速率的倒数(1/V)作直线,得出回归方程,计算K<,m>和<,max>.结果 在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性;随着作用时间的增加Ac-PABA生成的量逐渐增加,但在相同作用时间段龙葵碱能显著降低Ac-PABA生成的量.动力学研究表明,以PABA为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的K<,m>和V<,max>分别为(1.04 x 10<'-3>±8.36×10-5)mmol·L<'-1>、(1.64×10<'-4>±9.57×10<'-6>)nmol·10<'6>cells<'-1>,龙葵碱组的K<,m>和K<,max>分别为(1.06×10<'-3>±6.97×10<'-5>)mmol·L<'-1>和(1.48×10<'-4>±4.28×10<'-6>)nmol·10<'6>cells<'-1>·h<'-1>.对于HepG2细胞质,阴性对照组的K<,m>和V<,max>分别为(3.32×10<'-1>±2.35×10<'-4>)mmol·L<'-1>、(2.60×10<'-3>±6.79×10<'-6>)nmol·h<'-1>·mg pro<'-1>,龙葵碱组的K<,m>和K<,max>分别为(3.35×10<'-1>±1.66×10<'-4>)mmol·L<'-1>和(2.22x10<'-3>±8.12×10<'-6>)nmol·h<'-1>·mg(Pro)<'-1>,经统计学处理表明,对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的K<,m>没有差异,而V<,max>差异显著结论 龙葵碱是HepG2细胞NAT1酶的非竞争性抑制剂.龙葵碱通过作用于NAT1与PABA结合位点以外的其他位点抑制NAT1酶的活性而诱导HepG2细胞凋亡.
关键词： 龙葵碱 HepG2人肝癌细胞 N-乙酰化转移酶 来氏常数 最大反应速率
